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- 2025年12月22日
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泽叶生物
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6-12个月
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24次/48次
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分子生物学技术
真核细胞DNA的制备与定量|质粒DNA的碱裂解法提取与纯化|λ噬菌体DNA提取|DNA分子的限制性 内切酶消化|DNA片段回收与纯化|目的基因的亚克隆|PCR|引物参数计算|PCR产物的克隆|DNA序列测 定|Southern 杂交|PCR-SSCP|细胞凋亡|RNA操作中的一般要求|RNA的制备|mRNA的分离与纯化|RT-PCR|Northern Blot|RPA|ddPCR|原位杂交|原核表达|蛋白SDS电泳|Western|表达蛋白的分离与纯化|表达 蛋白的生物学活性的检测|真核转染
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文献和实验或不稳定时，这些变量就更为关键。 第 1 步 – 采用对照（实验严谨更可靠） 虽然使用酶消化制备染色质，可以改善 ChIP 操作规程，但合理的对照和高度特异性的抗体也同样重要。在实验操作步骤中添加阳性和阴性对照抗体可确保分析正常进行且结果可靠。阳性对照许多市售的试剂盒附带 Rpb1（RNA 聚合酶 II 的最大亚基）的抗体，做为阳性对照抗体。但是，Rpb1 仅在活性转录位点结合，因此，如果要研究的位点是非活性位点，那么 Rpb1 实际上将作为阴性对照使用。CST 推荐使用 Histone H3 (D
、TRANSFAC、ECR browser 等） 进行预测，然后确保设计的引物的扩增产物能够横跨这个预测的潜在结合位点。而对于组蛋白修饰（如 Tri-Methyl-H3-K9） 的 ChIP 实验，对引物的扩增范围要求则相对宽松，只要扩增产物能够位于启动子区域或基因转录区域即可。为了方便大家使用，CST 提供很多已经经过验证的检测多个基因的 ChIP primer，请前往 CST 官方网站直接输入 ChIP primer 进行搜索或联系 CST 技术支持（4006-473-287） 获取信息。对于 ChIP
实际上将作为阴性对照使用。CST 推荐使用 Histone H3 (D2B12) XP® Rabbit mAb (ChIP Formulated) #4620。该抗体可检测与基因组中所有 DNA 序列结合的所有组蛋白 H3 类型（H3、H3.3、CENP-A）。因此，不管检测的位点活性状态如何，该抗体都能为 ChIP 实验提供通用的阳性对照。 阴性对照 阴性对照抗体（如正常兔 IgG）不能识别特异抗原表位，因此可用于检测非特异性结合。例如，如果阴性对照样品中的产物量等于特异
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