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文献和实验研究应用|使用 NanoBiT 技术进行的蛋白质相互作用细胞内定位成像
NanoBiT 是一种结构互补报告分子系统,可用于 PPI 的细胞内检测。它已成功应用于药物筛选、信号传导分析和病毒感染机制分析等一系列研究领域。该系统由一个大型 BiT(LgBiT;17.6 kDa)和一个小型 BiT(SmBiT;11 个氨基酸)亚基组成,它们将与目标蛋白质融合。这些亚基随后在细胞中表达,因此只有靶向 PPI 才能使这些亚基形成功能酶,从而产生明亮的发光信号(图 1)。 图 1. NanoBiT 蛋白质相互作用系统概览(图像 Promega 提供) 1.
过程属于物理反应,荧光素酶催化底物发光属于化学反应。还有除了来源不同之外,它们主要在发光原理、检测方法和用途方面均有不同。 发光原理:荧光蛋白发光无需任何底物或辅助因子;而荧光素酶本身不发光,是通过与底物进行化学反应后释放出光子。 检测方法:荧光蛋白很容易通过共聚焦显微镜、荧光显微镜或流式细胞仪分析而在活细胞中被检测到。荧光素酶的活性定量检测通常使用酶标仪,荧光强度与荧光素酶活性成正比。另外,荧光蛋白的荧光信号远远强于荧光素酶系统,但其背景信号也较高,研究活体成像时灵敏度不如荧光素酶系统。 用途:荧
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