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- 武汉
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- 2025年10月12日
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![PC 61 5.3 细胞[PC 61; PC 61.5.3细胞] (杂交瘤细胞CD25)](https://img1.dxycdn.com/p/s14/2025/0425/844/6376956996475365191.png!wh200)
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1×10^6Cells/T25培养瓶
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文献和实验tjmedwnn：确定G418最佳筛选浓度用什么细胞？大家好，我现在做实验，用G418抗性的逆转录病毒包装系统收获病毒液做稳定转染，第一步需要用PT67细胞包装收获病毒液，说明书上说质粒转入PT67细胞后要用G418做筛选，之前需要用不同浓度的G418做一个最佳筛选浓度试验。请教大家，用来做确定最佳浓度试验的PT67细胞是用未经过任何处理的PT67细胞呢还是用已经转染过的PT67细胞？？另外收获病毒液后我需要用其转染干细胞，转染后同样需要用G418筛选，问题同上，首先做确定最佳G418浓度试验
问：构建逆转录病毒为载体的DNA（质粒），阳离子脂质体2000（过期的），转染病毒包装细胞pt67，G418筛选，在换液和传代过程中均会有细胞死亡（贴壁细胞漂浮）。求教原因。换液3.6ml DMEM+0.4ml新生牛血清+24μlG418传代用胰酶ph 7.2，1ml，用0.3ml新生牛血清中和，800rpm离心5min，弃上清，加入上述培养液。答：做一下G418浓度筛选，另外你的对照组未转染的细胞经同样浓度G418筛选后怎样呢？是否本来细胞状态不好？或是根本没有转进去呢？还有就是脂质
-PCR（RT-qPCR） 定量 RT-PCR（RT-qPCR）的最常见应用之一是通过对细胞和组织一段时间或事件后（如，药物治疗）实时 mRNA 水平的定量分析。RT-qPCR 比 RT-PCR 的灵敏度更高， RT-qPCR 基因表达定量的准确性在很大程度上取决于 cDNA 模板的质量和数量。因此，逆转录对于 RT-qPCR 的成功至关重要。所选择的逆转录酶应该具有以下特点： 高效合成 cDNA 的能力，即使是对低丰度基因以及次优质和/或难转录 RNA 样本。 在宽的 RNA 起始量范围内，cDNA
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