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- 2025年07月15日
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文献和实验一、反应曲线 首先，我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图，可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，如下图所示： 二、反应原理 对于延迟区来讲，无规律可寻，对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法，是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点，并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等，此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
一、实验目的 1.掌握酶分离纯化的一般步骤及相关原理； 2.悉碱性磷酸酶的分离纯化的方法步骤。 二、实验原理 有机溶剂分级沉淀是分离蛋白质的常用方法之一。有机溶剂能使许多溶于水的酌生物大分子发生沉淀，其主要作用是降低水溶液的介电常数。例如20℃时水的介电常数为80，82％的乙醇溶液的介电常数为40。溶液的介电常数降低意味着溶质分子间异性电荷库仑引力增加，从而使溶质的溶解度降低
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
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