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上海希言科学仪器有限公司
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文献和实验-Pak C18 (150 x 3.9 mm, ID) coated first with 5 mM Triton X-100 with 30% ACN and then 5 mM CPC; eluent: 10 mM Na2CO3; flow rate, 1.0 ml/min; detection, suppressed conductivity operated at 50 mA in the recycle mode; sample: 50 µL Peak: 1. 2 µg/ml 氟
,确保上样前柱子保留少量(0.5ml)的PBS溶液,活化液不收集;2. 将待净化液加入免疫亲和柱,流速不超过5 mL/min,不收集流出液;3. 用约20ml去离子水淋洗柱子,流速不超过5 mL/min,抽真空1分钟,不收集流出液4. 用1.5ml甲醇洗脱,流速控制在1d/s,收集洗脱液过膜后上机测试。 注:免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用5. 色谱条件: 色谱柱: Ultimate® XB-C18 250 mm x 4.6 mm,5μm(上海月旭提供)预柱
。 ( 10 ) 萃取液:0.5% 三氟乙酸(TFA ),40% 乙腈,10% 甲醇(用 dH2O 配制)。 2.2 高效液相色谱仪(NanoLC) ( 1 ) NanoHPLC 终极系统:Famos-Switchos-Ultimate ( Dionex-LC Packings,France) 。 ( 2 ) C18 反相柱:300 μm X 5 mm ( trap column ) 和 75 μm X 10 cm ( analyticalcolumn ; PEPMAPC 18
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