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上海瑶韵生物
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文献和实验5.1.2 乙醇溶液,浓度(V/V)为96%或100%5.1.3 乙醇溶液,浓度(V/V)为70%5.1.4 灭菌蒸馏水,按照灭菌蒸馏水配制标准操作规范5.2仪器及用具准备5.2.1 移液器,规格:20µl � 200µl、200µl � 1000µl5.2.2 移液器配套吸头,规格:200µl和1000µl,灭菌、无DNA /RNA 残留5.2.3 Eppendorf离心管,规格:1.5ml 或2.0 ml ,灭菌5.2.4 混匀器5.2.5 离心机(至少13,000 rpm,)5.2.6 水浴
(此步麦康凯培养基不做)。 不带有pBS质粒DNA的细胞,由于无Amp抗性,不能在含有Amp的筛选培养基上成活。带有pBS载体的转化子由于具有β-半乳糖苷酶活性,在麦康凯筛选培养基上呈现为红色菌落。在X-gal和ITPG培养基上为蓝色菌落。带有重组质粒转化子由于丧失了β-半乳糖苷酶活性,在麦康凯选择性培养基和x-gal和ITPG培养基上均为白色菌落。 四、 酶切鉴定重组质粒 用无菌牙签挑取白色单菌落接种于含Amp 50μg/ml的 5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时。使用煮沸
4℃数小时,使显色完全(此步麦康凯培养基不做)。不带有pBS 质粒DNA 的细胞,由于无Amp 抗性,不能在含有Amp 的筛选培养基上成活。带有pBS载体的转化子由于具有β-半乳糖苷酶活性,在麦康凯筛选培养基上呈现为红色菌落。在X-gal 和ITPG培养基上为蓝色菌落。带有重组质粒转化子由于丧失了β-半乳糖苷酶活性,在麦康凯选择性培养基和x-gal 和ITPG 培养基上均为白色菌落。 四、酶切鉴定重组质粒 用无菌牙签挑取白色单菌落接种于含Amp 50μg/ml 的5ml LB
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