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文献和实验模式匹配技术,Lindon 等 [ 8 ] 精彩的综述给出了更全面的指导。2. 材料 ( 1 ) Eppendorf 聚丙稀管,1.5 ml ( Eppendorf UK,Cambridge,UK )。 ( 2 ) [ 1H ] - NMR 抽提剂,准备足量使整体批次中每个样本加 1 ml,包含 80% ( V/V ) 氧化氘(D2O,99.9% D,Goss Scientific , Great Baddow, Essex, UK ) 、20% 氘代甲醇(CD3OD,99
6 待测样品cDNA 5ul7 ddH2O 30ul8 总体积 50 ul轻弹管底将溶液混合,6000rpm短暂离心。②将配制好的PCR反应溶液置于Realtime PCR仪上进行PCR扩增反应。反应条件为:93℃2分钟预变性,然后按93℃ 1分钟,55℃1分钟,72℃1分钟,共40做个循环,最后72℃7分钟延伸。7 实时定量PCR使用引物列表引物设计软件:Primer Premier 5.0,并遵循以下原则:引物与模板的序列紧密互补;引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构;引物不在模板的非目的
PCR的问题,无疑是绝大多数学生物的人都关心的问题。今天我们把相关内容整理出来,与大家共同讨论,希望对大家能有所帮助。引物设计所谓“工欲善其事,必先利其器”,这年头手工设计引物的人似乎不多,还是用软件方便些,防止你一不小心看走眼,丢一个碱基,同时计算起来也方便。设计软件有很多,既可以在线设计,也可以用Primer5、Oligo6.65 等等。有了软件就该讲讲怎么设计了引物设计的原则细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物
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