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- 详细信息
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大量
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上海瑶韵生物
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现货
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文献和实验免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。7.同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)悬浮细胞:1)收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640(无血清)培养基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培养液稀释 lg/ml,需预试寻找最佳稀释度,1:10-1:20);③需检测物10ul;④细胞悬液50ul(即5×104cell/孔),共100ul加入到96孔板(边缘孔用无菌水填充
(纯组织)加800 ul Trizol试剂。 二、DEPC处理方法如下 1. DEPC处理 (1)DEPC水:100 ml超纯水加入0.2 ml DEPC,充分混匀,高压灭菌。 (2) Tip头(枪头). EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材(包括1 ml. 200 μl. 20 μl Tip头;EP管和PCR反应管等):用0.1%的DEPC水(1000 ml超纯水加入1ml DEPC)37 ℃浸泡过夜,高压灭菌。 2. 提取RNA,用DEPC水溶
。 用含15%胎牛血清培养液培养细胞时,高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加,会试验敏感性。因此,一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后,尽量吸净培养孔内残余培养液。 二、实验步骤 (一)贴壁细胞 1. 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100 ul,铺板使待测细胞调密度至1 000-10 000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。 2. 5%CO2,37 ℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可
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