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文献和实验免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。7.同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)悬浮细胞:1)收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640(无血清)培养基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培养液稀释 lg/ml,需预试寻找最佳稀释度,1:10-1:20);③需检测物10ul;④细胞悬液50ul(即5×104cell/孔),共100ul加入到96孔板(边缘孔用无菌水填充
10% 胎牛血清。细胞培养物均根据 ATCC 的建议使用标准细胞培养方法维持和收获。 球状体形成的初始接种密度取决于细胞类型、球状体形式的生长期持续时间以及分析时球状体所需尺寸等因素。为更好地评估球状体的形成和生长,使用 96 孔球形微孔板在每孔 100 µL 生长培养基中以 40、200、1,000、5,000 和 10,000 个细胞的密度进行接种。通过CellTiter-Glo® 3D细胞活力测定法在 0、24、48 和 72 小时分别对球状体培养物进行分析。上述所有细胞系采用同一接种
PBSA中);MTT: 3- (4,5) -双甲基 - 2 -噻唑 - (2 ,5) -二甲苯基溴化四氮唑,50mg/ml,滤过除菌; Sorensen 甘氨酸缓冲液(0.1mol/L甘氨酸, 0.1mol/L NaCl,用1mol/L NaOH将PH调至10.5 );微滴定板(Linbro,ICN); 微吸头,最好放在高压灭菌的吸头盒中。 非灭菌材料的准备 塑料盒(无毒的聚苯乙烯,装培养板用);加样器;DMSO;ELISA读板仪。 体会(更新中) 1、尽管细胞
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