胆固醇酯酶

胆固醇酯酶;胆甾醇酯酶 物理性状及指标： 最适PH：酯化：PH=6.1-6.2，水解：PH=6.6-7.0 等电点：7.91(理论) 消光系数：86,680 cm-1M-1(理论)；E1%,280 = 20.01 (理论) 活性位点残留：丝氨酸(S194)；组氨酸(H435)；天冬氨酸(D320) 激活剂：胆酸盐(Vahouny et al. 1964)；甘胆酸盐(Vahouny et al. 1964)；牛磺胆酸盐 (Vahouny et al. 1964) 抑制剂：PMSF和对氯苯甲酸(Hyun et al. 1971, and Vahouny et al. 1964)；二异丙基氟磷酸(Momsen and Brockman 1976)；Hg2+, Ag+和离子洗涤剂；芳氨基甲酸酯(Feaster et al. 1996) 特异性： 胆固醇酯酶在胰腺的腺泡细胞中合成，储存在酶原颗粒中，且作为胰液的一部分分泌到小肠腔中(Labow et al. 1983)。胆固醇酯酶可水解很多酯底物，包括胆固醇酯、酰基甘油酯、磷脂(Brockerhoff and Jensen 1974)，视黄酯(Fredrikzon et al. 1978)，维生素酯和苯基酯(Rudd and Brockman 1984)。该酶具有一定的活性(Hui et al. 1993)，在水环境中本产品能够催化转酰基作用，因此被用作生物催化剂(Gallo et al. 1977, Kazlauskas 1989, and Feaster et al. 1996)。 组成： 本产品为糖蛋白，在盐环境中以六聚体形式存在(Hyun et al. 1971)，属于α/β水解酶折叠家族(Ollis et al. 1992，Cygler et al. 1993)。这个家族大部分均为酯酶类，具有二级和三级结构，大多数如丝氨酸蛋白酶，均运用丝氨酸酯酶催化机理进行反应(Kraut，1977)。 分子特征： 编码猪胆固醇酯酶的基因（LIPA）位于14号染色体上（基因ID：100142668）。该基因在人，黑猩猩，狗，牛，小鼠，大鼠，鸡，斑马鱼，果蝇，蚊子，线虫，酵母中为保守序列。 Protein Accession Number: NP_001116606 蛋白编号：NP_001116606 应用： 通过胆固醇氧化酶或过氧化物酶，对血清血浆中胆固醇进行测定；通过酯水解，酯化或酯交换反应，对光学活性醇类和羧酸进行合成。 胆固醇酯酶测定： 方法：505nm处的吸光度增加时测定胆固醇酯酶水解能力，1个单位胆固醇酯酶在37°C，pH 7.0时，每分钟水解1μmol胆固醇酯。 所需试剂： 0.1M磷酸盐缓冲液，pH=7.0 0.7mM 4-氨基安替比林溶于0.1 M磷酸盐缓冲液，pH=7.0，8h内使用 5.0mM苯酚溶于0.1M磷酸盐缓冲液，pH=7.0，8h后弃掉，苯酚为白色带晶状体，新配制溶液 5%Triton X-100，4℃储存 胆酸钠：将3.51g胆酸钠溶于10.0ml试剂级纯水。8h内使用 胆固醇氧化酶：每毫升试剂级纯水中溶解28.5个单位胆固醇氧化酶，8h内使用 过氧化物酶：每毫升试剂级纯水中溶解8200单位过氧化物酶，8h内使用 胆固醇酯：50ml异丙醇（ACS级）中溶解220mg胆固醇酯，需剧烈搅拌溶解。储存在4℃ 酶类： 在0.1M磷酸盐缓冲液溶解1mg/ml，进一步对溶液进行稀释（通常稀释到2-3倍），达到速率约为0.045/min。 步骤： 将紫外分光光度计调整为37℃，505nm。在烧杯中准备充足的母液可以完成5次试验。 将0.7 mM 4-氨基安替比林7.0ml；5.0 mM 苯酚7.0ml；胆酸钠0.5ml；5% Triton X-100 0.5 ml；胆固醇氧化酶0.25ml；过氧化物酶0.05ml轻轻混合，储存在4℃，8h内进行试验。 将3.0ml母液移至空白和试验比色皿中，加入0.10ml胆固醇酯，1h内混合均匀，平衡温度至37℃，比色皿加入0.1ml酶稀释液作为试验组，0.1ml试剂级纯水作为空白组。如果空白组每分钟反应速率超过0.005 ΔA，继续反应5min，使用反应开始5min线性关系测定试验组和空白组ΔA505。 用途及描述：科研试剂。 储存条件： -15~-20°C，避光防潮密闭干燥。 注意：我司产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。以上数据仅供参考交流之用。