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- 2026年01月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
TA克隆
- 提供商：
安必奇
服务内容
- 加“A”尾-PCR产物加“A”尾，Taq聚合酶可在PCR产物3'端自动加“A”尾，可跳过此步。
- 回收- PCR产物胶回收。
- 连接- 将PCR产物与T载体连接。
- 转化- 将连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞。
- 筛选- 测序筛选阳性克隆。
- ≥95%超螺旋；
- ≤0.005 EU/μg内毒素；
- 严格地无菌过滤环节；
- Animal-free，enzyme-free 质量保障。
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文献和实验PCR产物的TA克隆 (DNA的胶回收和连接) 【实验目的】 1.掌握DNA回收和连接的基本原理。 2.学习和掌握PCR产物的T-vector克隆。 【实验
快速TA克隆的突破T载体是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种：方法1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体有promega、takara；可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，要达到较好的连接效率，一般要过夜连接。国内很多公司模仿这种方法制作T载体，不仅连接时间也很长，而且做不到
现象可能原因解决方案 转化后无菌落生长 感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化，确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题，重新制备感受态细胞。 平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性，工作浓度 100 ug/ml 连接中使用了不恰当的vector:insert 比例估计PCR产物的量，将vector:insert比例限制在3:1到 1:5的范围内。对于极小的PCR产物进行克隆，很可能因为PCR产物严重过量，导致无菌落或菌落极少。 白色
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