Annexin V Alexa Fluor488/PI 细胞

贝博生物拥有一支技术力量雄厚的研发团队，包括蛋白质研究、细胞生物学、分子生物学、免疫学等方向的产品研究开发。贝博生物建立了高标准的质检系统，产品从原料、半成品、成品入库到销售之前，每一个环节都有严格的质检标准，并以标准的生产工艺，保证产品质量的稳定性。

样品染色：
1. 离心收集悬浮细胞。离心机300-500×g力，2-8°C，离心时间5分钟，弃培养基。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次。
3. 用纯水10倍稀释10X binding buffer为1X binding buffer。
4. 用400μl 1X Annexin V binding buffer重新悬浮细胞，浓度大约为1×106 cells/ml。
5. 在细胞悬浮液中加入5 μl Annexin V- Alexa Fluor 488染色液，轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育15分钟。
6. 加入5-10 μl PI染色液后轻轻混匀于2-8°C避光条件下孵育2-5分钟。
7. 立即用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

流式细胞仪分析：
上机检测前，必须用待测细胞制备三个质控样本来设定流式细胞仪的荧光补偿和设置十字门的范围：
① 空白管，没有染色的细胞：不加Annexin V- Alexa Fluor 488，不加PI。用于调节电压。
② 单染管，Annexin V- Alexa Fluor 488单染细胞：用明显凋亡的细胞，仅用Annexin V- Alexa Fluor 488染色细胞。用于调节补偿。
③ 单染管，PI单染细胞：仅用PI染色细胞。用于调节补偿。
④ 检测管：待测的处理细胞，加Annexin V- Alexa Fluor 488，加PI。用空白管和单染管调节好电压补偿后，获得所需要的流式数据。
经处理过的细胞此时可以在流式细胞仪上分析。激发波长为488nm。
按照常规的流式凋亡检测的操作即可。
Annexin V- Alexa Fluor 488的绿色荧光发射波长530nm，信号可以通过FL1（FITC接收器）通道检测；
PI红色荧光在620nm，通过FL2（Propidium iodide接收器）通道或FL3通道检测。