不稳定性血浆铁（labile plasma iron；LPI

不稳定性血浆铁（labile plasma iron；LPI）是血浆中非转铁蛋白结合的铁元素（non-transferrin bound iron；NTBI），常见于铁过剩（iron overload）疾病，导致细胞内铁聚集，而引起氧化损伤，破坏组织，刺激病原微生物生长。不稳定性血浆铁成为临床检测指标，以评价系统性铁过剩状况、铁毒性程度、氧化还原活性以及铁螯合剂治疗疗效，尤其是针对地中海贫血（Thalassaemia）、血色素沉着症（hemochromotosis）、反复输血、骨髓衰竭、干细胞移植、铁调素（hepacidin）缺失、膜铁转运蛋白（ferroportin）缺失、肝病、晚期肾病、糖尿病、骨髓异常增生综合征（myelodysplastic syndrome）等的去铁胺（deferrioxamine）、去铁酮（deferiprone）、地拉罗司（deferasirox）等的治疗效果。不稳定性血浆铁以不溶性多核氢氧化铁形式，例如柠檬酸铁或醋酸铁复合物、以及与类黄酮、氨基酸、白蛋白结合，而存在于血浆中。基于血浆或血清中非转铁蛋白结合的铁元素里具有氧化还原活性，且容易被螯合的铁成分，在低浓度抗坏血酸的存在下，催化产生自由基，通过荧光探针二氢罗丹明123（dihydrorhodamine123）反应后荧光峰值的变化（激发波长485nm，散发波长538nm），来定量分析不稳定性血浆铁的活性。

产品内容

HEPENGBIO缓冲液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO荧光液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO螯合液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO标准液（Reagent E） 微升
产品说明书 1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；HEPENGBIO反应液（Reagent B）和HEPENGBIO荧光液（Reagent C）避免光照；有效保证3月

用户自备

1.5毫升离心管：用于标准样品操作的容器
200微升1厘米光径比色皿或黑色96孔板：用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。HEPENGBIO荧光液（Reagent C）室温下融化，避免光照。然后进行下列操作

• 样品准备

选择一：血浆样品

1. 准备好肝素或ACD抗凝管（注意：避免使用EDTA抗凝管）
2. 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3. 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4. 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）
5. 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存

选择二：血清样品
1． 准备好不含抗凝剂的储存管

1. 抽取1毫升血液，置于储存管里
2. 室温下，静置30分钟，直至血液凝结
3. 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
4. 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
5. 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存

• 测定准备

1. 准备好待测样品（例如血清或血浆样品等），置于冰槽里
2. 设定好荧光分光光度仪或荧光酶标仪（温度为37℃）：激发波长485nm，散发波长538nm；增益倍数100
3. 准备好4个1.5毫升离心管，标记为1至4号管
4. 分别加入xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）到每个离心管
5. 移取xx微升HEPENGBIO标准液（Reagent E）到1号管，混匀
6. 小心移取xx微升1号管稀释的HEPENGBIO标准液（Reagent E）到2号管，混匀
7. 小心移取xx微升2号管稀释的HEPENGBIO标准液（Reagent E）到3号管，混匀
8. 小心移取xx微升3号管稀释的HEPENGBIO标准液（Reagent E）到4号管，混匀
9. 将1至4号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	HEPENGBIO缓冲液（Reagent A）	HEPENGBIO标准液（Reagent E）	测定体系标准铁浓度
1	xx微升