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文献和实验第八章 比色分析 第一节 比色分析的基本原理 比色分析是基于溶液对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法,又称吸光光度法。 有色物质溶液的颜色与其浓度有关。溶液的浓度越大,颜色越深。利用光学比较溶液颜色的深度,可以测定溶液的浓度。 根据吸收光的波长范围不同以及所使用的仪器精密程度,可分为光电比色法和分光光度法等。 比色分析具有简单、快速、灵敏度高等特点,广泛
呈色的强度取决于反应中酶结合物的浓度和加入竞争抑制物的量。 竞争法 ELISA 不易用自视判断结果,因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异,一般均用比色计测定,读出 S、P和 N 的吸光值。计算方法主要也有两种,即阳性判定值法和抑制率法。 a. 阳性判定值法 与间接法和夹心法中的阳性判定值法基本相同,但在计算公式中引入阳性对照 A 值,现举某种检测抗 HBc 的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照为不含抗 HBc 的复钙人血浆,阳性对照中抗HBc含量为 125±1 00u/ml。每次试验设
样本 1) 取50 mg组织置于培养皿中,手术剪剪碎,加入200 μL预冷的裂解液工作液,冰上用玻璃匀浆器匀浆 (组织量加倍时,加入的预冷裂解液也加倍)。 2) 将匀浆好的样本转移到1.5 mL的离心管中,冰浴放置5 min裂解。 3.12,000 rpm在4°C下离心10-15 min。 4.小心地吸取上清转移至新的EP管中,并置于冰上待用。 5.立即测定Caspase的酶活性或者-70°C保存样本,亦可取少量样本用Bradford法[E-BC-K168,详询当地经销商]测定蛋白浓度。 6.Caspase
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