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- 赫澎生物
- 上海
- HPBIO-JM6021-10次
- 2025年11月28日
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干燥密封保存
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现货
- 供应商：
赫澎（上海）生物
- 规格：
20次
（serine/threonine）的磷酸化，诸如CREB、Histone H1、CREM、NF-κB和核受体等，而调控一系列细胞活动。其磷酸化目标序列为Arg-Arg-X-Ser/Thr或Lys-Arg-X-X- Ser/Thr。蛋白激酶A 至少有两个亚酶：I型亚酶存在于胞浆内，而二型亚酶与细胞膜、细胞器和细胞骨架相关。基于底物XXXXXX，在ATP的存在下， 受到PKA激酶的磷酸化，获得产物磷酸化多肽，进而通过酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶
（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其峰值的变化（340nm），来定量分析蛋白激酶A的活性。其反应方式为：
产品内容
HEPENGBIO 清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO 裂解液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO 缓冲液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO 酶促液（Reagent D） 微升
HEPENGBIO 反应液（Reagent E） 微升
HEPENGBIO 底物液（Reagent F） 微升
HEPENGBIO 阴性液（Reagent G） 微升
产品说明书 1 份
保存方式
保存 HEPENGBIO 清理液（Reagent A）在 4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，严格避免光照和反复冻融；有效保证 6 个月。
用户自备
PKA 激酶：用于抑制剂筛选
1.5 毫升离心管：用于样品保存的容器
15 毫升锥形离心管：用于样品处理的容器细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离
（微型）台式离心机：用于细胞预处理
比色皿或酶标板：用于比色分析操作的容器分光光度仪或酶标仪：用于样品比色分析
实验步骤
一、 待测样品准备
- 准备好 25cm2细胞培养瓶或 60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1 至 5 X 106细胞）
- 小心加入 毫升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A），覆盖生长表面
- 小心抽去清理液
- 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：避免使用胰酶消化）
- 加入 毫升 HEPENGBIO 清理液（Reagent A），混匀细胞
- 移入到预冷的 15 毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）
- 放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g
- 小心抽去上清液
- 加入 微升 HEPENGBIO 裂解液（Reagent B），充分混匀 10．转移到预冷的 1.5 毫升离心管
- 强力涡旋震荡 15 秒
- 置于冰槽里孵育 30 分钟
- 放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
- 小心移取 500 微升上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管
- 移取 10 微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 HEPENGBIO Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒 ）
- 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作二、 测定准备
- 准备好待测样品（例如组织裂解悬液等），置于冰槽里
- 设定好分光光度仪（温度为 30℃）：波长为 340nm，间隔 <
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