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赫澎(上海)生物
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文献和实验组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一--PI法schoman无论是肿瘤或其它正常新鲜组织均可用PI(碘化丙啶)的方法来检测,这是一种常见而且便宜的方法。主要操作步骤如下:1、组织块用0.25%胰酶消化30min-1h。2、200-400目筛网过滤细胞,获得单细胞悬液。3、75%乙醇(-20度预冷)固定细胞1h。4、加入PI(终浓度50ug/ml)和无DNA酶污染的RNA酶(终浓度50ug/ml)1ml染色30min-1h。5、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。注意事项: 1、组织消化后使细胞
在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时,膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化,而此阶段Propidium Iodide(PI)不能通过细胞膜。细胞坏死时,虽然也会发生磷脂酰丝氨酸外翻,但此时细胞膜的通透性明显
。染色体中的组蛋白去乙酰化可使染色体的结构更加致密,从而抑制基因的转录。组蛋白去乙酰化酶抑制剂使染色体由致密状态变为活化状态,从而使一些抑制肿瘤生长的基因激活。因此,这些抑制剂有望开发为肿瘤治疗的药物。组蛋白去乙酰化酶(HDAC)在哺乳动物中可分为3类。 (1)第一类:为酵母转录调控子 RPD3 蛋白的同类物,这是第一个被鉴定出来的 HDAC。它包括 HDACl~3,可与转录因子E2F 结合,通过与 Rb 蛋白相关途径抑制转录。 (2)第二类:为酵母 HDAl 类蛋白质,包括 HDAC4~
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