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文献和实验佚名 血清中IgM是由5个单体通过一个J链和二硫键连接成五聚体,分子量最大,为970kD,沉降系数为19S,称为巨球蛋白(macroglobulin)。在分子结构上IgM无铰链区,Cμ2可能替代了铰链区的功能。在生物进化过程中IgM是最早出现的免疫球蛋白,如八目鳗可产生IgM。在个体发育过程中,无论是B细胞膜表面Ig(SmIg),还是合成分泌到血清中的Ig
大多数IgM类抗体是优球蛋白不溶于水,故可用双蒸水透析纯化IgM。对那些溶于水的IgM类抗体可用饱和硫酸铵沉淀。沉淀后可以采用颗粒排斥层析法(凝胶过滤)进一步纯化。 颗粒排斥层析(size-exclusion chromatography)法又称分子筛层析或凝胶过滤,是利用微孔凝胶分离不同大小分子的抗体,可用于样品中IgG和IgM的分离,常用于对硫酸铵粗提物的进一步纯化。通过该法纯化所得抗体可用于Ig分子片段的制备、FITC、生物素或同位素标记。 一、材料和试剂
(一)材料 1.血清 2.葡聚糖凝胶G200 3.洗脱液0.01Mol/L pH7.4PBS(0.14Mol/L NaCl或0.1Mol/L pH8.0 Tris-HCl 0.14Mol/L NaCl)。 (二) 操作方法 选取2.50cm×90cm层析柱,用葡聚糖凝胶G200装柱,平衡后,直接加血清样品10ml或硫酸铵粗提制品,洗脱液洗脱,流速0.25ml/min,分管收集,测OD280 值,第一峰即为IgM
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