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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6-12months
- 英文名:
Recombinant Cisplatin Resistance Associated Overexpressed Protein (CROP)
- 库存:
大量
- 供应商:
泽叶生物
- 规格:
50ug/100ug/1mg
上海泽叶生物科技有限公司是一家集研发、生产和销售于一体的生命科学实验室产品创新性高科技企业。主要从事免疫学,重组蛋白,细胞因子,抗原/多肽/蛋白等产品主要包括免疫调节蛋白、白细胞介素、CSFs、生长因子、干扰素、Chemokines 、Adipokines 、TGFß / BMP Proteins、神经因子、FGFs和TNF配体/受体防御因子等。并代理销售Amresco,qiagen Millipore,eBioscience,Sigma,SANTA,Sciencell,R&D、GBD、ATCC、HYCLONE, CELLutions Biosystems INC , Neuromics , Chemicon, Equitech-bio, Biovision, Promega, Kamiya, Prospec, Cytoskeleton, Novagen, SurModics, Cytelligen LONZA等二十多家国外知名品牌,致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务。
经甲醛固定的部分组织细胞,因固定过程中可能会形成醛键或羧甲基而封闭部分抗原决定簇,使免疫组化标记敏感性明显降低,因此在染色前,有些抗原需进行修复或暴露。
抗原修复方法可分为化学方法和物理方法。化学方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制浓度与消化时间要适度。常用的物理方法有单纯加热、微波处理和高压加热。在选用这三种方法时,浸泡切片的缓冲液的离子强度和pH、加热的温度和时间均影响着抗原修复效果。
1、pH的应用范围及选择
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0。目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液。作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。
2、抗原修复时应选择最佳温度
70-90℃的温度对未经固定的蛋白质可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白质,温度必须达到92℃以上方能使其变性。研究结果显示,温度为92-98℃是合适的,95℃效果最好。
3、抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的
抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,绝对不能为了争取时间,强行用冰块或冷水使其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其他的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。
4、尽量使用足量的抗原修复液
应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓液体的沸腾时间,增加切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。
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文献和实验:这个问题比较宽泛,也没有标准的答案,我们只能结合目前的一些经验说一下。我们义翘神州经过十多年的重组蛋白表达,在细胞、载体及培养基等整体表达体系都进行了优化。经过优化的体系,HEK293 瞬转表达重组蛋白体系的细胞密度要高于 CHO 细胞,所以在蛋白表达量方面,HEK293 瞬转表达的重组蛋白要比 CHO 更好一些。但在蛋白的修饰和活性方面,我们目前还没有发现明显的差异。3. 用合成的 300bp 片段基因,蛋白怎么都表达不出来怎么办?解答:首先需要确定,这段合成的基因片段有没有经过密码子优化?是不是
的浓度是否适合诱导,生长状态不好的表达菌,一方面会造成目的蛋白的错误折叠,造成蛋白大小,形态等发生改变,另一方面会因为IPTG的加入,导致菌体的死亡或者降解。低温度诱导有助于蛋白二硫键的正确折叠,但对于高温表达的蛋白不适合低温状态,温度过高容易导致包涵体的形成。2.诱导剂:基因的诱导表达基于乳糖操纵子调节机制,没有乳糖存在的时候,阻碍物基因产生阻碍蛋白,阻碍蛋白和操纵子结合,抑制基因的表达;当有乳糖存在的时候,B-半乳糖苷酶和乳糖作用产生异半乳糖,异半乳糖和阻碍蛋白结合,解除抑制,激活基因,开始表达蛋白
。2、增强了IgG的Fc段结合能力:通过基因的修饰,除去了蛋白中不与抗体Fc段结合的部分,增强了蛋白摩尔的结合能力,也去除了蛋白A中,与血清中杂蛋白的结合。3、避免了葡萄球菌的污染:传统制备蛋白A的方法中需要大量培养葡萄球菌,而葡萄球菌又是一种可以污染环境、人体治病的微生物。在大规模的发酵、提纯过程中葡萄球菌不可避免造成环境的污染。采用现代基因工程的技术,避免葡萄球菌在储存、生产、发酵或纯化中的污染。III、广州精达公司-重组蛋白A纯化柱国外公司重组表达蛋白A的产品,由于垄断利率和进口中间商的操作
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