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- 详细信息
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- 技术资料
- 保存条件:
Box 1,-70°C储存; Box 2,-20°C储存。
- 英文名:
Discover-sc WTA Kit V2
- 库存:
充足
- 供应商:
南京诺唯赞生物科技有限公司
- 规格:
12 rxns/24 rxns/96 rxns
| 规格: | 12 rxns | 产品价格: | ¥15000.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 24 rxns | 产品价格: | ¥27000.0 |
| 规格: | 96 rxns | 产品价格: | ¥72000.0 |
Discover-sc WTA Kit V2
单细胞转录组测序文库构建

第一链cDNA合成, 全长cDNA扩增,产物可用于基因表达差异;融合表达,可变剪切分析

模板起始量低:单个细胞或10pg Total RNA即可作为起始模板,进行高效扩增
扩增灵敏度高:使用LNA技术及精心优化的反应体系,大幅度增加了低表达基因的检出量
产物完整性好:通过双端引物扩增全长cDNA,获得全转录组信息,避免了5'和3'偏好性
操作成功率大:大大减少了RNA样品的处理,从而较大限度避免了样品损失的风险,提高了操作成功率
体积兼容性广:样品兼容体积可高达5 μl,兼容不同浓度的模板进行扩增

1.模板起始量低,扩增产物cDNA完整性好
10 pg 293T细胞Total RNA用Discover-sc WTA Kit V2进行扩增,取1 μl cDNA扩增产物用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析。试剂盒以Oligo dT Primer为逆转录引物,并利用Discover-sc Reverse Transcriptase的Template-switching活性在cDNA的3’端添加一段接头序列,通过该接头序列进行后续的PCR扩增,获得全长cDNA扩增产物,同时避免了rRNA的污染。

2.文库质量分析—数据基本指标
Vazyme-1和Vazyme-2是单个293T细胞经过Discover-sc WTA Kit V2 进行扩增,C-1和C-2是单个293T细胞经过用C公司单细胞转录组试剂盒进行扩增,取1 ng cDNA扩增产物经TruePrep DNA Library Prep Kit V2 for Illumina构建文库。以下均为此文库数据分析。
3.基因表达总体情况分析

Discover-sc WTA Kit V2试剂盒扩增产物检测灵敏度高,单个293T细胞检测到基因数高达15000个。
4.数据分布均一,无偏好性

左图为Vazyme-1测序片段在基因上的分布结果,右图为C-1测序片段在基因上的分布结果,数据显示Discover-sc WTA Kit V2扩增很好的保证了基因5’和3’的覆盖。
5.表达重复相关性高
左图为Vazyme-1和Vazyme-2表达重复相关性分析,右图为C-1和C-2表达重复性相关性分析。数据结果表明表达重复相关性高于C公司。
Discover-sc WTA Kit V2能以1-1000个细胞或10 pg-10 ng总RNA为模板,通过第一链cDNA合成及扩增,获取足够的用于序列分析的样本,从而解决了诸如单细胞等微量样本因RNA含量过低导致的无法使用常规mRNA-seq进行测序分析的技术难题。试剂盒以Oligo dT Primer为逆转录引物进行cDNA合成,并利用Discover-sc Reverse Transcriptase的Template-switching活性在cDNA的3’端添加一段接头序列,通过该接头序列进行后续的PCR扩增,获得全长cDNA扩增产物,有效避免了cDNA合成过程中的3’偏好性和rRNA的污染。
Discover-sc WTA Kit V2是在Discover-sc WTA Kit基础上开发的升级版本,其检测灵敏度、体积兼容性均得到了大幅度提升,更加适合低丰度基因及低浓度模板的检测。


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文献和实验Combinatorial Peptide Ligand Libraries to Discover Liver Disease Biomarkers in Plasma Samples
from hepatitis B virus infected patients were treated with ProteoMiner™ enrichment kit and analyzed by two dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry. This approach allowed us to identify plasma gelsolin as possible candidate biomarker for hepatitis B
化到相似的浓度水平。最后,剩余的 cDNA 分子在 PCR 反应中被扩增以生成可测序的文库(图 2)。 图2 | 使用双链特异性核酸酶 (DSN) 处理酶法去除丰富的序列。 DSN 处理应用广泛,特别是用于注释的测序流程,DSN处理被普遍使用。它可用于从特征较少的物种中获取转录组信息,这些物种无法使用使特定探针进行靶向去除高丰度转录本的方法,以及不具有 poly(A) 尾而无法通过 poly(A) 选择富集 mRNA 的物种(3) . 因此,一些 RNA-Seq 试剂盒及常用的去除方法
、结果稳定,可重复性强;无需进行复杂的文库构建,微生物DNA扩增产物可以直接进行测序,实验周期短;测序数据便于进行生物信息分析。 该方法得到顶级期刊的认可(Nature等),已成为土壤微生物多样性检测的重要手段。上海美吉生物公司已有若干成功案例,为客户提供的土壤样本进行高通量测序并进行生物信息学分析。高通量测序因其数据量大,操作过程简单,尽可能避免了繁琐的实验操作过程所造成的样本损失,能够相对客观的反应出土壤样本的真实情况。 二、高通量测序在土壤微生物研究中的应用 1、 研究土壤







