人PCDH1检测试剂盒

人PCDH1检测试剂盒使用目的）
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中原钙黏素1(PCDH1)含量。
实验原理)

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中原钙黏素1(PCDH1)水平。用纯化的人原钙黏素1(PCDH1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入原钙黏素1(PCDH1)，再与HRP标记的原钙黏素1(PCDH1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的原钙黏素1(PCDH1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人原钙黏素1(PCDH1)浓度。

人PCDH1检测试剂盒内容)

试剂名称	数量	试剂名称	数量
96孔板(预包被)	1	96孔板覆膜	2
标准品	0.5ml×1	标准品稀释液	1.5ml×1瓶
显色剂A液	6ml×1瓶	样品稀释液	6ml×1瓶
显色剂B液	6ml×1瓶	终止液	6ml×1瓶
酶标试剂	6ml×1瓶	密封袋	1
浓洗涤液(30×)	1×20mL	使用说明书	1

样品收集、处理及保存方法)
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
人PCDH1检测试剂盒操作步骤）
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加
标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（例如稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为90pg/ml, 60pg/ml, 30pg/ml,15pg/ml, 7.5pg/ml）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测
样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20 倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如
此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50ul，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50ul，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
人PCDH1检测试剂盒精密度）
精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批内差： CV<10%
批间差： CV<12%
试剂盒性能）
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.92 以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
产品类型: ELISA kit
规格: 48T/96T
检测波长:450nm
种属:Human/人
所需样本体积: 50-100ul
有效期：6个月
保存条件：2-8℃