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- miaolingbio
- 武汉
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- 2026年08月03日
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文献和实验Northern杂交试验指导手册－为制备RNA探针模板的DNA片断亚克隆
Bluescript M13- (2.96kb, T7/T3 ). 按照试验的经济有效原则，本试验选用 Bluescript M13-。 B. 目的DNA序列与载体连接 从所建立的cDNA文库中挑选出带有目的DNA片断的克隆，扩增后提取质粒，采用限制性内切酶处理或采用PCR特异扩增的方法分离出目的DNA片断；采用标准质粒提取方法提取载体质粒（见黄健试验）。然后按下列程序进行连接。 试剂及其制备 T4 DNA连接酶 连接缓冲液（可直接购买或配制），10
pGEM-3Z ( 2.74kb, T7/SP6 ). PGEM-3Zf(-) (3.2kb, T7/SP6 ). Bluescript M13- (2.96kb, T7/T3 ). 按照试验的经济有效原则，本试验选用 Bluescript M13-。 B. 目的DNA序列与载体 连接 从所建立的cDNA文库中挑选出带有目的DNA片断的克隆，扩增后提取质粒，采用限制性内切酶处理或采用PCR特异扩增的方法分离出目的DNA片断;采用标准
基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量尽可能减少,以便于基因工程操作。大多质粒载体带有一些多用途的辅助序列,这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA 序列、鉴定片段的插入方向、外源基因的大量表达等。一个理想的克隆载体大致应有下列一些特性：（1）分子量小、多拷贝、松驰控制型；（2）具有多种常用的限制性内切酶的单切点；（3）能插入较大的外源DNA 片段；（4）具有容易操作的检测表型。常用
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