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载体构建
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西安淳风生物科技有限公司
载体构建是分子生物学研究常用的手段之一。主要包括已有载体多克隆位点MCS的改造和已有载体启动子、增强子、筛选标记等功能元件的改造。载体构建完成后可利用PCR原理进行测序验证。
载体构建(vectorconstruction):为把DNA分子运送到受体细胞中去,必须寻找一种能进入细胞、在装载了外来的DNA片段后仍能照样复制的运载体。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。
无缝克隆法:基因克隆的引物设计及目的DNA片段的扩增,与常规PCR法是相同的。唯一的差异在于载体末端和引物末端应具有15-20个同源碱基,由此得到的PCR产物两端便分别带上了15-20个与载体序列同源性的碱基。通过相关酶试剂处理,同时除去载体与目的DNA上同源片段的双链中的一条链,这样载体和目的DNA两端就露出了能够互补配对的序列,依靠同源序列碱基间的配对能使载体和目的DNA较为紧密的连在一起而无需酶联,直接用于转化。
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