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49
- 供应商:
上海莼试
- 肿瘤类型:
详见说明书
- 细胞类型:
未定
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- 免疫类型:
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- 细胞形态:
淋巴母细胞样
- 是否是肿瘤细胞:
详见说明书
- 器官来源:
小鼠杂交瘤细胞
- 运输方式:
干冰(第二代培养末期液氮冻存)。
- 年限:
详见说明书
- 生长状态:
半贴壁生长
细胞名称 小鼠杂交瘤细胞;SCGN-F9
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 半贴壁生长
特征特性 该细胞属专利保藏,其特征特性尚未公开。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes)10%FBS
传代方法 1:3传代,3-4天传1次
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
小鼠杂交瘤细胞;SCGN-F9操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
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文献和实验位点) VH5’IgG-GGGGCGGCCGC GTTTTGGCTG[A/C][A/G]GAGAC[A/G/T]GTGA VH3’IgM-GGGGCGGCCGC TGACTCTCTG[A/C][A/G]GAGAC[A/G/T]GTGA 4)小鼠VL3’端引物(引入NotⅠ酶切位点) VL5’-GCGGCGGCCGC AGCCCGTTT[G/T]ATTTCCA[A/G]CTT (2)从杂交瘤细胞提取RNA,反转录成cDNA,均按试剂盒说明书操作。
这首先要从抗体的产生来探讨。把某一抗原免疫某种动物而得到单抗或多抗。如果用经免疫过的动物的脾细胞获得杂交瘤细胞,则得到单克隆抗体,如果用动物的血清,则得到多克隆抗体。但从理论上说,这些抗体都应针对抗原来自的动物,例如如果用 人蛋白 抗原免疫小鼠,则这些 抗体 为鼠抗人。 由于一个大蛋白分子表面具有多种抗原决定簇,因此,免疫动物后,这些不同的决定簇分别诱导动物产生不同的 抗体
瘤来源的动物是相同品系,例如使用SP2/0骨髓瘤细胞时应该选用Balb/C小鼠,同时必须使用品系纯正的小鼠。 (2)培养基中加入了过高浓度的HAT,或者仅A的浓度过高或HT的浓度过低,建议用纯的骨髓瘤和已有的杂交瘤作HAT浓度筛选。 (3)培养基不正确或血清浓度不正确或使用了劣质血清。 (4)未正确制备饲养层细胞。参见本站有关饲养层细胞制备的部份。 (5)接种杂交瘤细胞的培养板过多。一般在5-20块96孔板为宜。 (6)融合后,未及时转移或稀释
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