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组织特异性条件性点突变小鼠模型

组织特异性条件性点突变小鼠模型
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简介: 实验技术服务
提供商: 威斯腾生物
服务名称: 组织特异性条件性点突变小鼠模型
地区: 全国

组织特异性条件性点突变小鼠模型

一、组织特异性条件性点突变小鼠模型

指点突变能被引入特定细胞或组织中目的基因位置的小鼠模型。突变蛋白的表达水平及表达谱与野生蛋白的表达一致,并在小鼠的整个发育时期都有表达。

二、优势与不足
优势:能避免常规点突变导致的致死表型(胚胎干细胞致死、嵌合鼠致死或F1代杂合子小鼠致死),突变基因只在特定的细胞或组织中表达。
不足:设计点突变策略时必须保证突变基因的表达水平及表达谱与野生基因的表达一致。

三、组织特异性条件性点突变小鼠模型原理:

条件性基因点突变主要是通过染色体位点特异性重组酶系统来实现的,如Cre-LoxP系统、 FLP-Frt系统和Dre-Rox系统等,其中最常用的是Cre-LoxP系统。这一系统是在待突变的一段目的基因序列的两端各放置一个LoxP序列,得到Floxed(Flanked by loxP)小鼠。该floxed小鼠在与表达Cre重组酶的小鼠杂交前,目的基因表达完全正常,从而能够避免全基因点突变可能出现的致死性表型。而当该floxed小鼠与组织特异性表达Cre重组酶的小鼠杂交后,即可获得目的基因在特定的组织或细胞中表达突变蛋白的小鼠,而该基因在其它组织或细胞中表达正常。

Floxed小鼠如果与不同的Cre重组酶小鼠杂交,可以使目的基因的突变发生在小鼠的任一组织或细胞中。此外,如果与控制Cre重组酶表达的诱导系统相结合,还可以使目的基因的突变发生在小鼠发育的任一阶段,实现对目的基因点突变的时空两方面调控

四、组织特异性条件性点突变小鼠模型应用:

1、致死性目的基因的研究;2、药物的靶标确认;3、药物的临床前评价。
五、服务流程:
1、方案评估
2、方案报价
3、确定服务内容
4、签订服务合同
5、进行实验,定期向客户反馈
6、整理实验报告
7、完成合同内容
8、售后服务
9、合作完成

【本平台合作项目】
分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!
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【电话】 023-65316016,023-65316556
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组织特异性条件性点突变小鼠模型一、组织特异性条件性点突变小鼠模型:指点突变能被引入特定细胞或组织中目的基因位置的小鼠模型。突变蛋白的表达水平及表达谱与野生蛋白的表达一致,并在小鼠的整个发育时期都有表达。二、优势与不足:优势:能避免常规点突变导致的致死表型(胚胎干细胞致死、嵌合鼠致死或F1代杂合子小鼠致死),突变基因只在特定的细胞或组织中表达。不足:设计点突变策略时必须保证突变基因的表达水平及表达谱与野生基因的表达一致。三、组织特异性条件性点突变小鼠模型原理:条件性基因点突变主要是通过染色体位点特异性重组酶系统来实现的,如Cre-LoxP系统、 FLP-Frt系统和Dre-Rox系统等,其中最常用的是Cre-LoxP系统。这一系统是在待突变的一段目的基因序列的两端各放置一个LoxP序列,得到Floxed(Flanked by loxP)小鼠。该floxed小鼠在与表达Cre重组酶的小鼠杂交前,目的基因表达完全正常,从而能够避免全基因点突变可能出现的致死性表型。而当该floxed小鼠与组织特异性表达Cre重组酶的小鼠杂交后,即可获得目的基因在特定的组织或细胞中表达突变蛋白的小鼠,而该基因在其它组织或细胞中表达正常。Floxed小鼠如果与不同的Cre重组酶小鼠杂交,可以使目的基因的突变发生在小鼠的任一组织或细胞中。此外,如果与控制Cre重组酶表达的诱导系统相结合,还可以使目的基因的突变发生在小鼠发育的任一阶段,实现对目的基因点突变的时空两方面调控。四、组织特异性条件性点突变小鼠模型应用:1、致死性目的基因的研究;2、药物的靶标确认;3、药物的临床前评价。五、服务流程:1、方案评估2、方案报价3、确定服务内容4、签订服务合同5、进行实验,定期向客户反馈6、整理实验报告7、完成合同内容8、售后服务9、合作完成【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!【全国免费热线】:400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwes
组织特异性条件性基因敲除(Conditional Knockout)小鼠模型一、介绍:组织特异性的条件性基因敲除小鼠模型指通过基因敲除技术,使目的基因在特定组织或细胞中不表达,而在其他组织或细胞中正常表达的动物模型。二、优势与不足:优势:这种打靶策略能避免全基因敲除可能引起的胚胎致死及表型复杂等问题,同时因为目的基因只在特定组织中失活,能用于研究该基因在特定组织中的功能,而该基因在其他组织中仍能正常表达;不足:设计时需要对基因进行全面的分析,避免基因敲除导致内源性基因的表达下调或截短蛋白的表达。得到的种系遗传小鼠模型需要与组织特异性表达重组酶的小鼠交配才能得到组织特异性敲除小鼠,使后续繁殖时间比全基因敲除小鼠模型至少多交配一代。三、条件性基因敲除操作原理:主要是通过染色体位点特异性重组酶系统来实现的,如Cre-LoxP系统、 FLP-Frt系统和Dre-Rox系统等,其中最常用的是Cre-LoxP系统。这一系统是在待敲除的一段目的基因序列的两端各放置一个LoxP序列,得到Floxed(Flanked by loxP)小鼠。该floxed小鼠在与表达Cre重组酶的小鼠杂交前,目的基因表达完全正常,从而能够避免全基因敲除可能出现的胚胎致死。而当该floxed小鼠与组织特异性表达Cre重组酶的小鼠杂交后,即可获得目的基因在特定的组织或细胞中被敲除的小鼠,而该基因在其它组织或细胞中表达正常。floxed小鼠如果与不同的Cre重组酶小鼠杂交,可以使目的基因的敲除发生在小鼠的任一组织或细胞中。此外,如果与控制Cre重组酶表达的诱导系统相结合,还可以使目的基因的敲除发生在小鼠发育的任一阶段,实现对目的基因表达的时空两方面调控。四、应用具有胚胎致死性目的基因的研究;目的基因在特定组织中的生理或病理功能研究;药物的靶标确认;药物的毒理学研究五、服务流程:1、方案评估2、方案报价3、确定服务内容4、签订服务合同5、进行实验,定期向客户反馈6、整理实验报告7、完成合同内容8、售后服务9、合作完成更多实验技术服务请见中心网站,或来电询洽!【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO
诱导性条件性点突变小鼠模型一、诱导性条件性点突变小鼠模型:指在诱导剂的作用下,点突变能在特定的时间点被引入特定细胞或组织中目的基因位置的动物模型。诱导前表达野生型蛋白;诱导后,突变的蛋白在全身所有特定的细胞或组织中表达。二、优势与不足:优势:能避免常规点突变导致的致死表型(胚胎干细胞致死、嵌合鼠致死或F1代杂合子小鼠致死),使模型小鼠能够正常生长发育,在实验需要的发育时期给予诱导剂,小鼠表达突变蛋白。不足:设计点突变策略时必须保证突变基因的表达水平及表达谱与野生基因的表达一致。三、诱导性条件性点突变小鼠模型原理:诱导性的条件性基因敲除系统是基于细胞核激素受体与相应的激素配体结合后,细胞核激素受体将由细胞浆转位到细胞核发挥其基因表达调控作用。雌激素受体(ER)就是这样一种细胞核激素受体,它能结合雌激素,同时能结合雌激素的拮抗剂-他莫昔芬。当ER处于失活状态时,它在胞浆中与热休克蛋白90(Hsp90)结合,不能进入细胞核;但当胞浆中存在雌激素或他莫昔芬时,ER与Hsp90分离,同时与雌激素或他莫昔芬结合,并能够进入细胞核。利用ER的这一作用特点,将Cre重组酶与ER融合,当胞浆中没有雌激素或他莫昔芬时, CreER融合蛋白就会与Hsp90结合,CreER融合蛋白不能进入细胞核,从而将Cre重组酶滞留在胞浆;当胞浆中存在雌激素或他莫昔芬时,CreER融合蛋白与Hsp90分离,并与雌激素或他莫昔芬结合,从而能够进入细胞核。在细胞核中,Cre重组酶识别目的基因中的两个loxP位点并发挥其重组活性,获得基因敲除动物模型。在动物模型制备的应用中,为了消除内源性雌激素的影响,研究者将雌激素受体的配体结合区进行突变,从而使其不能与体内的生理性雌激素结合,而只能与外源性的雌激素类似物-他莫昔芬结合,这样就消除了内源性雌激素所造成的非特异性基因敲除,保证了Cre的表达受他莫昔芬的给药时间控制,目前常用的雌激素受体融合蛋白为CreERT2。同时Cre的表达受组织特异性启动子的调控,从而使Cre能在特定的组织或细胞表达。四、诱导性条件性点突变小鼠模型应用:1、致死性目的基因的研究;2、目的基因在发育或年龄相关疾病方面的研究;3、药物的靶标确认;4、药物的临床前评价。五、服务流程:1、方案评估2、方案报价3、确定服务内容4、签订服务合同5、进行实验,定期向
先全敲再条件性敲除(Knockout first, Conditional ready)小鼠模型一、产品介绍:指同一个设计可以首先获得全基因敲除小鼠模型,与合适的工具小鼠交配后,还可以获得条件性敲除小鼠模型。而且在敲除目的基因的同时还能敲进报告基因。二、优势与不足:优势:通过报告基因的表达能够示踪目的基因的表达情况。不足:设计时需要对基因进行全面的分析,避免基因敲除导致内源性基因的表达下调或截短蛋白的表达。目的基因的全敲除可能引起胚胎致死或导致其他基因表达的调控紊乱,所以项目设计时需要充分分析此类风险。三、先全基因敲除再条件性基因敲除原理:先全基因敲除再条件性基因敲除KO first conditional ready 设计方案是通过在内含子中插入一个基因破坏盒来达到敲除的目的。除了基因破坏盒,在目的基因敲除的外显子两侧各插入一个loxP位点,因此得到的floxed(flanked by loxP)小鼠是敲除目的基因同时敲进报告基因与抗性基因的小鼠。根据实验需要,通过灵活选择Cre/LoxP重组系统或者Flp/FRT重组系统,可同时获得全基因敲除和条件性基因敲除小鼠模型。即当此floxed小鼠与全身表达Cre的小鼠交配时,可获得目的基因敲除同时敲进报告基因的小鼠。而当此floxed小鼠与Flp小鼠交配时,可修复已敲除基因的表达,在此基础上再与组织特异性表达Cre的小鼠交配又可获得目的基因条件性基因敲除的小鼠。 四、先全基因敲除再条件性基因敲除应用:1、通过报告基因的表达示踪所敲除目的基因的表达信息,方便基因研究;2、药物的靶标确认;3、药物的毒理学研究五、服务流程:1、方案评估2、方案报价3、确定服务内容4、签订服务合同5、进行实验,定期向客户反馈6、整理实验报告7、完成合同内容8、售后服务9、合作完成更多实验技术服务请见中心网站,或来电询洽!【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!【全国免费热线】:400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-weste

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