三角培养瓶，2.0L，透气盖，Baffled（缓冲底），PC

各类细胞培养小结

表面的透明软骨，以磷酸缓冲液（PBS含青霉素、链霉素各100U/L）冲洗2遍，将软骨剪切成1－3mm3 左右碎块，0.25%胰蛋白酶先消化30-35分钟，PBS浸洗2遍；后置于50ml玻璃培养瓶，加0.1%Ⅱ型胶原酶(DMEM配制)，37消化3.5－4.5小时，每小时置37℃恒温振荡箱振荡5min。直到软骨块大部分呈肉眼可见的絮状物，倒置显微镜下观察，软骨细胞大部分分离后，以弯头吸管轻轻吹打，细胞悬液以1200r/min离心7分钟，弃上清，以含10％新生牛血清DMEM的培养液终止消化，离心弃上清

细胞培养技术扫盲——入门必知篇

： （A） 摇动法： 可利用分裂中期细胞变圆与底物附着不牢特点，此时可持培养瓶，左右反复横向水平摇动，可使90%的中期分裂细胞从瓶壁脱落； （B） 消化法： 将培养液倒入离心管内，给培养瓶内加0.025%胰蛋白酶液0.5-1ml/瓶，水平左右摇动，便培养瓶底壁面完全接触消化酶，稍后用弯头吸管吹打，待细胞完全脱落后，加入3-5ml前培养终止消化。用吸管移入装有培养液的离心管内2000rpm10分钟。弃上清液，留沉淀细胞； （4）低渗处理：给沉淀细胞加顶温的37℃0.075MKCL8ml左右，用吸管打均匀

实验小窍门

麻醉或颈椎脱臼处死后.  将小鼠的尾巴提起.  整个身体浸入装有75%酒精的烧杯中3sec左右（默数5下）.  取出放置到灭菌的培养皿中.  移入工作台内。用有齿弯镊迅速摘除小鼠眼球.  转移至超净台中的解剖显微镜载物台上的冰盒上.  冰盒上覆盖经过无菌处理（120度烘烤4-6小时）的平展的锡纸。用眼科显微器械（显微镊.  显微剪刀.  显微剔刀等）在显微镜下仔细剥离视网膜（具体步骤可见上面帖子中的《视网膜铺片ADP酶染色》）剥离出视网膜组织后.  迅速用显微剔刀转移至提前准备好堵塞细胞培养瓶或培养皿中