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文献和实验芯片的构建和阅读摘要制作芯片和获得芯片的数据有许多不同的方法。这里我们介绍了在学术领域中两种芯片的构建和使用。除了详细说明了技术细节外,我们还对组成和方法的优缺点进行了评论,同时还介绍了杂交的方法。用我们所建立和使用芯片的方法来回答生物领域问题的事实证明了这种技术在大学的环境下是可行的。一种获得基因功能信息的高通量的方法是cDNA芯片。在一块显微镜载玻片上包含了几百至几千个固定的DNA样本,以类似于Northern blot 和Southern blot的方法进行杂交。了解了这个方法
切片面积的大小:因为芯片捕获区域的面积为6.5mm X 6.5mm,所以我们要控制切割区域在这个面积以内; 2,冰冻切片的厚度:冰冻切片的厚度一般设置在10μm,但是根据不同的组织类型,切片厚度也会有所调整。例如脂肪含量较高的乳腺组织可能需要更厚的切片; 3,冰冻切片质量:由于不同的组织样本中脂质、蛋白质含量有所差异,冷冻组织的硬度和延展性并不相同,因此切片的环境温度也有所要求。温度过低,会导致组织块过硬,切片出现碎裂、薄厚不均或孔洞;而温度过高,导致组织变软,硬度不够,切片无法成形或者出现褶皱。 冰冻
就可以在基片上制作出近百微米的小探针点.每平方厘米可排布近20000个探针,克服了喷墨打印技术制备探针阵列密度较小的缺点。 寡核昔酸芯片的杂交和检测分析:样品处理和杂交检测方法与cDNA芯片是一致的。由于寡核昔酸阵列多需要区分单碱基突变.因此严格控制杂交液盐离子浓度、杂交温度和冲洗时间是杂交实验成败的关键。 cDNA芯片(cDNA Chip) 概念:在玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜等固相载体上固定的成千上万个cDNA分子组成cD4A微阵列。制作cDNA芯片最常用的固相载体是显微镜载玻片
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