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文献和实验【共享】Western blot 免疫印迹标准流程（完整版）
4ml PBS并用枪轻轻吹打洗涤，然后2500rpm离心5min。弃上清后用PBS重复洗涤一次。3、 用枪洗干上清后，加100 μl裂解液（含PMSF）冰上裂解30min，裂解过程中要经常弹一弹以使细胞充分裂解。4、 将裂解液与培养瓶中裂解液混在一起4℃、12000rpm离心5min，取上清分装于0.5ml离心管中并置于－20℃保存。（二） 蛋白含量的测定 （BCA试剂盒测定）（1） 制作标准曲线1、 从－20℃取出1mg/ml BSA，室温融化后，备用。2、 取18个1.5ml离心管，3个一组
试剂配制 （一）母液 1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g 蒸馏水 200ml 溶解后，用浓盐酸调pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。 PH HCl 7.4 约17ml 7.5 约16m 7.6 约15ml 8.0 约10ml 1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 0.174g 异丙醇 100ml 溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。 0.2mol/L
液（含PMSF）冰上裂解30min，裂解过程中要经常弹一弹以使细胞充分裂解。 4、 将裂解液与培养瓶中裂解液混在一起4℃、12000rpm离心5min，取上清分装于0.5ml离心管中并置于-20℃保存。 （二） 蛋白含量的测定 （1） 制作标准曲线 1、 从-20℃取出1mg/ml BSA，室温融化后，备用。 2、 取18个1.5ml离心管，3个一组，分别标记为0μg，2.5μg，5.0μg ，10.0μg ，20.0μg ，40.0μg。 3、 按下表在各管中加入各种试剂。 0μg
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