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- 2025年07月12日
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文献和实验mg/ml): 在800μl蒸馏水中溶解200mg IPTG后,用蒸馏水定容至1ml,用0.22μm滤膜过滤除菌，分装于eppendorf管并储于-20℃。 7.含Amp 的LB 固体培养基:将配好的LB 固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右,加入Amp 储存液,使终浓度为50μg/ml,摇匀后铺板。 8.含X-gal 和IPTG 的筛选培养基：在事先制备好的含50μg/ml Amp的LB 平板表面加40ml X-gal储液和4μlIPTG储液,用无菌玻棒将溶液涂匀,置于37℃下放
MgCl2。 ( 22 ) MnCl2 储液：5 mmol/L MnCl2。 ( 23 ) GFX PCR DNA 和切胶回收试剂盒。 2.2 转化、蛋白质表达和纯化 ( 1 ) 丁醇。 ( 2 ) 电感受态大肠杆菌 XL-1 Blue 细胞。 ( 3 ) Electroporator ( Bio- Rad) 。 ( 4 ) 2YT：16 g 胰化（蛋白）胨、10 g 酵母提取物、5 g NaCl 溶于 1 L 水中；高压灭菌。 ( 5 ) 转化盐
/well）到实验孔。加完刺激物之后不要再拍击ELISPOT板。有人认为拍击板子会让刺激物在孔中混合均匀，实际上，通过扩散，刺激物也会很快混合均匀。拍击板子会让细胞成圈的分布在孔的外周。 当加完所有的样品之后，盖上板盖，放入二氧化碳培养箱，37°C培养18-24小时。注意在整个培养过程中避免移动、碰撞培养板。为了取得更好的结果，甚至开关培养箱的箱门也应该禁止。因为碰撞会造成细胞的移位，造成斑点的模糊、拖尾。 （3） 第三天：培养后操作 倾倒孔内的细胞及培养基。 低渗法将细胞裂解，每孔加入200μL
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