Tris-EDTA抗原修复液（10×,pH9.5）

免疫组化实验染色效果差？原来你一直忽略的是它!

水质对免疫组化染色结果的影响显著: 在免疫组化染色过程中，实验用水一般用来配制两种试剂: 01 抗原修复液 包括柠檬酸(pH6.0) 、EGTA(pH 9.0) 和EDTA(pH9.0) 等种类，主要用于抗原修复。在免疫组化染色前，必须进行抗原修复，使抗原决定簇充分暴露，以便完全彻底地与抗体结合。未进行抗原修复的抗体即使阳性，其阳性细胞数量及染色强度要明显比进行过抗原修复的少、弱。电导率高的水因杂质存在容易影响溶液pH值，pH值或高或低都会造成抗原修复不佳，抗原决定簇不能完全彻底暴露

缓冲液配制指南

使用 3～5 次。 转移缓冲液 1X 电转液： 加蒸馏水溶解定容至 1000 mL 溶解后 4 ℃ 保存，1 次溶液可重复使用 3～5 次。 TBS 缓冲液 加蒸馏水溶解，冰醋酸调 pH 至 7.2，定容至 1000 mL。室温保存。 洗脱液 TBST 溶液 TBS 溶液 1000 mL ，1 mL 吐温 20，混匀后即可使用，最好现用现配。 封闭液（含 5% 脱脂奶粉的 TBST 缓冲液） 溶解后使用，一次性使用。 RIPA（中）裂解液 Tris-base、NaCl、EDTA、SDS

免疫组化染色方法及常用抗原修复方法

一、SP 法 1）脱蜡、水化；2）PBS 洗 2～3 次各 5 分钟；3）3% H2O2（80% 甲醇）滴加在 TMA 上，室温静置 10 分钟；4）PBS 洗 2～3 次各 5 分钟；5）抗原修复；6）PBS 洗 2～3 次各5分钟；7）滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8）滴加Ⅰ抗 50μl，室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9）4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10）PBS 洗 3 次各 5 分钟；11）滴加 Ⅱ 抗 40～50 μl，室温