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说明:用于Western Blot。性能稳定,显色持久。BCIP (5- 溴-4- 氯-3- 吲哚- 磷酸) 与 NBT ( 四唑硝基蓝) 合用,可用于碱性磷酸酶活性的比色法检测。每一瓶BCIP 同时提供一瓶NBT。
检测碱性磷酸酶时,底物的制备方法:每5ml 碱性磷酸酶缓冲液 (100mM Tris-HCl [pH 9.0], 150mM NaCl, 1mM MgCl2) 中加入33μl 的NBT 和16.5μl 的BCIP。先加入NBT,混匀后,再加入BCIP,再次混匀。该试剂配制好后,应在1 小时内使用。未用试剂应弃掉。
特点
• 质量检测:每一批BCIP/NBT 显色底物均经过检验可用于印迹分析。
储存条件:储存于4℃或-20℃。
特性
• 浓度:BCIP (50mg/ml) 溶于100% 二甲基甲酰胺;NBT(50mg/ ml) 溶于70% 二甲基甲酰胺。
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文献和实验) 曝光或是图像设备采集。由于其同样具有持续的发光过程,因此也可以进行多次曝光。在尼龙膜上使用CSPD或CDP-Star底物的杂交,还可进行探针的拨离和重探。 NBT/BCIP 使用类似NBT/BCIP显色底物的好处就在于,检测的过程中不需要X胶片,既可以使用尼龙膜也可以是使用硝化纤维素膜。然而,如果想要获得高灵敏度的检测结果,可能就需要较长的时间了(几个小时)。这种方法也有其不足之处:首先这种方法只能一次性获得信号
I采用了显色法,使用显色底物 NBT/BCIP;而Starter Kit II选用化学发光法底物CSPD。 如果您用来合成探针的DNA模板的量比较少或是质量不够高的时候,建议您使用PCR DIG Probe Synthesis Kit。该试剂盒专用于制备高灵敏度的杂交探针,例如单拷贝的基因。其另一个特点就是实验中无需定量斑点检测过程,通过定量凝胶电泳就可以快速确定PCR标记探针的效率。
(NBT/BCIP) RNA探针的标记反应 1、取1μg纯化模板DNA,加入无菌、无RNase的EP管中,以DEPC水补齐体积至6.5μl 2、在冰上加入下述试剂 10×NTP labelig mixture 7 1μl 10×Transcription buffer 8 1μl Rnase inhibator 10 0.5μl RNA polymerase SP6 11 1μl or RNA polymerase T7 12 1μl 轻轻混匀,短暂离心 37℃孵育2小时——
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