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- 2026年01月15日
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说明：Trypsin( 胰蛋白酶) 能够特异地水解赖氨酸和精氨酸残基的羧基端肽键。未经修饰的胰酶会自我水解，形成片段，从而干扰蛋白质测序、HPLC 或肽链的质谱分析。另外，自我水解将会导致假胰酶产生，表现出额外的胰凝乳蛋白酶的特性。Promega 的胰蛋白酶经过了甲基化还原反应修饰，极大程度的阻止自我水解。在功能稳定测试中，经过修饰的胰酶在37℃孵育3 小时后保留的活性至少是未修饰胰酶的2 倍。
经过修饰的测序级胰蛋白酶进一步经过TPCK 处理和亲和层析纯化，得到高度活性和稳定的分子。测序级修饰胰酶以每瓶20mg 提供，使用方便，并配有优化了稳定性的重悬缓冲液。建议使用蛋白酶: 蛋白比例为1:100 到1:20(w/w)。
推荐的反应缓冲液：50mM NH4HCO3 (pH 7.8)。
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文献和实验基于质谱的蛋白质鉴定，第6节：MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备
MALDI-TOF-MS最初用于等分试样（1μL或更少）样品的质谱鉴定，用于检查肽的纯度或PMF。大批量的样品测定，往往使用Edman降解法测序或ESI-MS，如四极（Q）-TOF-MS 质谱。做出以上选择的原因，主要是因为MALDI技术进行分析，上样量不能超过0.5μL。这种样品制备方法极大地限制了MALDI技术检测的整体灵敏度，并且还限制了可以分析的肽浓度，因为肽和基质共结晶过程的质量对于检测的灵敏度和准确性都非常重要。MALDI技术通常将等体积的样品和MALDI基质溶液混合，将肽混合
液（冰浴配制）：0.0125 μg/μl 测序级胰蛋白酶，溶解于 25 mmol/L 碳酸氢铵缓冲液（含 5 mmol/L n-OGP) 。 2. MALDI-TOF 质谱 ( 1 ) α-氰基-4-羟基肉桂酸粉末，重结晶。 ( 2 ) 水（HPLC 级或 Milli-Q 级）。 ( 3 ) 乙腈（色谱纯）。 ( 4 ) 丙酮（色谱纯 )。 ( 5 ) 乙醇（色谱纯）。 ( 6 ) TFA 溶液：0.1% TFA ( HPLC 级）水溶液
而成)，静置30min后，弃去上清液。然后加200/ul水清洗，静置30min后弃上清液。重复该步骤直至胶粒变为五色。 2. 脱水干燥：在胶粒中加入200ul乙腈静置30min后，弃上清液。重复该步骤至凝皎完全脱水变白。将乙腈吸出舍弃后，将胶粒置于37℃至完全干燥。 3. 酶液泡胀：测序级的胰蛋白酶用20mmol/L碳酸氢铵溶液配制为浓度12.5ng/ml后，加入适量酶液于胶粒中，并于4~C放置30rain使胶粒完全泡涨。然后吸出多余的酶液弃去，以防止质谱检测时出现过多的胰蛋白酶自身降解
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