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说明:RNasin® Plus RNase Inhibitor (RNasin® RNA 酶抑制剂) 是一种作为可溶性蛋白在E. coli 中表达的重组哺乳动物RNase 抑制剂,可以利用离子交换和疏水层析相结合的方法纯化获得。该蛋白能够抑制真核RNase( 如RNase A 和RNase B) 活性,与人胎盘RNase 抑制剂相似。RNasin® Plus RNase Inhibitor 经过RT-PCR 检验,能与AMV、M-MLV 和ImProm-IITM Reverse Transcriptases 或Taq 及Tfl DNA Polymerases 兼容。RNasin® Plus RNase Inhibitor 在 TaqMan® 检测中发现也能和定量、实时RT-PCR 兼容。与人源的这种蛋白相比,该抑制剂具有更高的抗氧化活性。研究表明来源于人的该蛋白的两个半胱氨酸对氧化非常敏感并形成二硫键封闭了抑制剂的活性位点。由于天然氨基酸的多样性,RNasin® Plus RNase Inhibitor 不能形成封闭位点的二硫键。此外,还发现这种重组蛋白具有以前从未认识的特性,即在50℃以上能持续抑制 RNase。因此,RNasin® Plus RNase Inhibitor 能够在加热前、加热中及加热后保护RNA,即使在RT-PCR 中第一链DNA 合成温度下亦如此。
特点
• 增强的抗氧化能力:由于天然氨基酸的多样性,RNasin® Plus RNase Inhibitor 不能形成人源蛋白在氧化条件下会形成的封闭活性位点的二硫化物。
• 高纯度:产生的核酸酶抑制剂蛋白的纯度>90%,无E. coli RNase 残留。
• 与 RT-PCR 系统兼容:RNasin® Plus RNase Inhibitor 已被证明可与Access and Access QuickTM RT-PCR Systems、ImProm- IITM Reverse Transcription System 和Reverse Transcription System 兼容。同样也被证明可与基于TaqMan® 的RT-PCR systems 兼容。
• 在 RNA 模板变性过程中保护RNA:即使在70℃加热RNasin® Plus RNase Inhibitor 和RNase 的混合物15 分钟,也不会导致RNA 酶的活性复苏。许多RT-PCR 操作方法需要在RT 反应前将RNA 模板在RT 引物存在时变性( 例如65-70℃, 5-10 分钟) 以获得最大灵敏度。现在您可以在这一步骤中加入 RNasin® PlusRNase Inhibitor。
• 可保护较高温度下的RT 反应:可在RT 反应过程中加入 RNasin® Plus RNase Inhibitor,与ImProm-IITM 和AMV Reverse Transcriptases 等一起在50℃以上进行反应。在高温下可能存在的RNase 会失活。
• 可定制或批量订购:从以下网址获得更多关于该产品的定制选项:www.promega.com/myway/
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文献和实验1、焦磷酸二乙酯(DEPC):是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂,他通过和RNA酶的活性基因团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。 2、异硫氰酸胍:目前认为是最有效的RNA酶抑制剂,它在裂解组织的同时也使RNA酶失活,它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来,又对RNA酶有强烈的变性作用。 3、氧钒核糖核苷复合物:由氧化钒离子和核苷形成的复合物,它和RNA酶结合
RNASafer® Protocol for Total RNA Isolation
实验步骤 1. Protocol for total RNA purification from tissue sample with E.Z.N.A.® Total RNA System 1) Remove sample from RNASafer® Reagent using forceps. 2) Estimate the amount of the tissue and select
E.Z.N.A.® Mag-Bind® Viral DNA/RNA Spin Protocol
实验原理 If using the E.Z.N.A.™ Mag-Bind® Viral DNA/RNA Kit for the first time, please read this booklet to become familiar with the procedure and its various modification. Samples are lysed in a specially formulated buffer
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