质谱测定重组蛋白分子量

Strep-tag 0 基础如何入门？

Strep-tag®技术是亲和纯化重组蛋白的常用工具，它基于自然界中最强的非共价相互作用之一，即生物素与链霉亲和素的相互作用。该纯化系统的突出特点是纯化过程温和、目的蛋白纯度高、特异性强、兼容多种表达系统，对于有挑战性蛋白的纯化十分有帮助，因此近些年来脱颖而出。   本文将从以下方面介绍Strep-tag®技术： 标签介绍 纯化原理 标签-配体 纯化步骤 系统特点 标签介绍 目前有2种广泛使用的Strep标签： 它们分别是： Strep-tag®II 8 aa小标签(Trp-Ser

【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。

[img][/img]Protein A 柱之进化 Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将Protein A 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。 早期的Protein A柱结合的都是天然Protein A。天然Protein A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图1所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然

亲和层析

填料 根据亲和层析的几种应用方向，亲和层析的填料主要分为标签蛋白纯化填料、抗体及抗体片段纯化填料、族特异性亲和填料以及预活化填料四种。   1. 标签蛋白纯化填料 为了简化纯化流程以及方便后期的检测，在进行重组蛋白表达时往往会加入标签。常用的标签包括His标签、GST标签、Strep标签及MBP标签等 （表8)。His标签由于分子量很小，几乎不会影响靶蛋白结构和功能而被广泛使用。GST和MBP标签常用于促进蛋白的可溶表达，尤其对于难表达的真核细胞蛋白和病毒蛋白有很好的促溶表达能力。Strep