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鼠抗人前白蛋白(PA),HRP标记

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  • Ms1033-0201
  • 2026年02月12日
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      -20℃

    • 克隆性

      多克隆

    • 规格

      0.1ml

    液体、无菌,溶于0.01mol/L磷酸盐缓冲液中,PH7.4、含0.14mol/L氯化钠及50%甘油
    本品为辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗-PA 单克隆抗体。该特异性针对于PA的抗原位点,与人血清其他成分无任何交叉反应。可用于ELISAIHC Blot等科学研究实验。
    本品使用或存放时须避开强光源, -20℃存放。不含任何添加剂或防腐剂,使用时注意避免交叉污染。

    实验试剂

    1. 0.1M NaIO4:称取241mg高碘酸钠溶于蒸馏水10ml中。

    2. 1mM PH4.4醋酸钠缓冲液:0.2M NaAc (1.361克/50ml) 3.7ml;0.2M HAc (0.601ml/50ml) 6.3ml;加蒸馏水至2,000ml。

    3. 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液:Na2CO3 0.32g;NaHCO3 0.586g;加蒸馏水至50ml,再用蒸馏水作20倍稀释,即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。

    4. NaBH4溶液(4mg/ml):临用时称取NaBH4 4mg溶于1ml蒸馏水中。

    5. 其它的试剂及器材可参见戊二醛标记法。

    实验步骤

    1. 称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。

    2. 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液,室温下避光搅拌20分钟。

    3. 将上述溶液装入透析袋中,对1mM PH4.4的醋酸钠缓冲液透析,4℃过夜。

    4. 加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液,使以上醛化桯RP的PH升高到9.0-9.5,然后立即加入10mg IgG(抗体,或SPA 5mg)在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中,室温避光轻轻搅拌2小时。

    5. 加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液,混匀,再置4℃ 2小时。

    6. 将上述液装入透析袋中,对0.15M PH7.4 PBS透析,4℃过夜。

    7. 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵,置4℃ 1小时。

    8. 3000rpm离心半小时,弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次,最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。

    9. 将上述溶液装入透析袋中,对0.15M PH7.4的PBS缓冲盐水透析,去除铵离子后(用萘氏试剂检测),10,000rpm离心30分钟去除沉淀,上清液即为酶结合物,分装后,冰冻保存。

    10. 结果判定

    除标记物IgG量的计算,略有不同以外,其余均同戊二醛法。

    IgG量(mg/ml)=(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62

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