液体、无菌,溶于0.01mol/L磷酸盐缓冲液中,PH7.4、含0.14mol/L氯化钠及50%甘油。
本品为辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗-PA 单克隆抗体。该特异性针对于PA的抗原位点,与人血清其他成分无任何交叉反应。可用于ELISA、IHC、 Blot等科学研究实验。
本品使用或存放时须避开强光源, -20℃存放。不含任何添加剂或防腐剂,使用时注意避免交叉污染。
实验试剂
1. 0.1M NaIO4:称取241mg高碘酸钠溶于蒸馏水10ml中。
2. 1mM PH4.4醋酸钠缓冲液:0.2M NaAc (1.361克/50ml) 3.7ml;0.2M HAc (0.601ml/50ml) 6.3ml;加蒸馏水至2,000ml。
3. 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液:Na2CO3 0.32g;NaHCO3 0.586g;加蒸馏水至50ml,再用蒸馏水作20倍稀释,即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。
4. NaBH4溶液(4mg/ml):临用时称取NaBH4 4mg溶于1ml蒸馏水中。
5. 其它的试剂及器材可参见戊二醛标记法。
实验步骤
1. 称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。
2. 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液,室温下避光搅拌20分钟。
3. 将上述溶液装入透析袋中,对1mM PH4.4的醋酸钠缓冲液透析,4℃过夜。
4. 加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液,使以上醛化桯RP的PH升高到9.0-9.5,然后立即加入10mg IgG(抗体,或SPA 5mg)在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中,室温避光轻轻搅拌2小时。
5. 加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液,混匀,再置4℃ 2小时。
6. 将上述液装入透析袋中,对0.15M PH7.4 PBS透析,4℃过夜。
7. 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵,置4℃ 1小时。
8. 3000rpm离心半小时,弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次,最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。
9. 将上述溶液装入透析袋中,对0.15M PH7.4的PBS缓冲盐水透析,去除铵离子后(用萘氏试剂检测),10,000rpm离心30分钟去除沉淀,上清液即为酶结合物,分装后,冰冻保存。
10. 结果判定
除标记物IgG量的计算,略有不同以外,其余均同戊二醛法。
IgG量(mg/ml)=(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62