- ¥120
- shinegene
- ZS00201
- 2026年01月07日
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上海闪晶生物
SYBR Greenl 荧光染料与dsDNA结合荧光信号可增强800-1000倍. 在PCR反应体系中, 加入过量染料, 它将特导性地掺入DNA双链后, 荧光信号增强, 而不掺入链中的染料分子荧光不变, 从而保证荧光信号的增加与PC产物的增加完全同步. 荧光值可以在退火阶段或者伸阶段测定. 一般在使用SYBR G reen l 时应根据实际情况优化使用浓度, 反应的终浓度为1*到0.2*之间.
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文献和实验上来讲，虽然那张融解曲线图虽然很美，但是未免有凑结果的感觉。 言归正传，引物浓度ABgene是推荐70nM，我现在一般50-100nM都有做。 然后说temp的浓度，temp的浓度显然不是越浓越好的，我曾经做过的一个实验是要检测基因在genomic DNA上的copy数，直接加了20ngDNA来做，做出来结果很差。后来就把DNA做了稀释梯度来做，发现奇了怪了，怎么越稀释，Ct反而越靠前了。想了很久，想明白了如果模板太多，在复性的时候铁定模板先吃到SYBR，等差不多产物快复性了，SYBR
SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度，需要摸索，从200nM到700nm等，设置不同浓度。3、每个引物浓度，从well 1到12设置4个样本，阳性cDNA 1和2，NTC以及H2O，做triplicate。4、若用ABI7000或7700，所有的PCR条件可设置成一致的，减少麻烦，当然，引物
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