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大量
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佰泰科
- 英文名:
Goat anti-human albumin,serum
- 规格:
1ml
羊抗-人白蛋白 血清,不含任何防腐剂,请避免微生物污染。用于免疫组化,免疫比浊法,ELISA等。对人白蛋白双向扩散>1∶64
本品须避免反复冻融,-20℃存放。
抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清,一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。高效价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。
一种抗原能否引起抗体生成反应,一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇(Antigenic determinant),另一方面取决于机体的免疫状态,当具备以上两个条件后,抗体生成将遵循抗体生成的一般规律——初次反应和再次反应。
抗原的种类繁多,包括天然的蛋白质抗原和细胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等,不同的抗原免疫动物具有不同的特殊性。一般完全抗原免疫动物需加用佐剂,尤其在使用可溶性抗原时,以期得到高效价的抗血清;合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物质需先通过人工的方法与蛋白质载体连接后再与佐剂混合免疫动物,方可获得理想的免疫效果。
佐剂的条件作为一种良好的佐剂,必须具备下列条件:
(1) 增加抗原的表面积,并改变抗原的活性基团构型,从而增强抗原的免疫原性;
(2) 佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间,减低抗原的分解速度,使抗原缓慢释放至淋巴系统中,持续刺激机体产生高滴度的抗体;
(3) 佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之增生,从而增强了体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能;
(4) 良好的佐剂应具有无毒性或副作用低的特点。
配制方法:按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内,用超声波使之混匀,高压灭菌,置4℃下保存备用。
在免疫动物前,先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合,佐剂和抗原体积比一般为1:1,制备成 “油包水”乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物,注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异,无统一标准和固定模式。一般是每兔(约2kg重)或每羊(约20kg重)第1次注射抗原1mg,以后逐次增加抗原量,最多每次不超过3mg.佐剂与抗原乳化可按如下方法进行:
(1) 研磨法:先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内,待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液,边滴边按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,继续研磨一段时间,使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。医学教育|网搜集整理本法适于制备大量的佐剂抗原,缺点是研钵壁上粘附大量乳剂,抗原损失较大。
(2) 注射器混合法:将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内,两注射器之间以一细胶管相连,注意排净空气,然后交替推动针管,直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到无菌操作,抗原损失少,适用于制备少量的抗原乳剂。但同时难以乳化完全,个别抗原,用塑料注射器根本推不动,而用玻璃注射器又有渗漏。制备好的乳化剂经鉴定才能适用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴状浮于水面,即乳化完全,为合格的油包水剂。
(3) 超声:实验室条件好点的,比如说有超声破碎仪的,一定要控制超声频率和时间,超声容易激发一些自由基,对抗原有未知损害。乳化方法要根据抗原和需要而定。
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文献和实验蛋白样品制备中,在细胞破碎之后,既可以利用特定蛋白质的特性来分离某一类蛋白质,比如亲和纯化,比如前面介绍的磷酸化蛋白富集,或者膜蛋白富集;另外一个考虑方向是去除杂质----去掉样品中某些非目标高丰度蛋白或者杂质的干扰,同样可以达到简化样本的目的。当然要小心「倒洗脚水的时候别把婴儿也倒掉了」,一定要选择可靠的产品。 比如,潜在疾病标志物的最好样本来源就是血清或其他体液,此类样本可以提供人蛋白质组中绝大部分组份。然而用蛋白质组分析方法鉴定疾病标志物最大的挑战来自于血清中大量的高丰度
血清Western Blot去除白蛋白(Albumin)和IgG
应用Western Blotting的方法检测血清中某种蛋白的含量是,最关键的问题是要将血清做怎样的电泳前处理. 一般的处理方式: 1. 常规分离血清,即取血后常温放置,使其凝固,然后 3000 rpm 15 min 离心 , 取上清即可。 2. 测血清蛋白浓度。 3. 用 Laemmli buffer (蛋白裂解液)稀释至所需浓度
试验 aG毒种每次传代收剖后均须做无菌试验,合格者方可使用。 1.2.2病毒滴定 aG毒种用体重11~13g小白鼠进行脑内病毒滴定,滴度≥8.0LogLD50/1.0mL方可用于生产。 1.2.3纯毒试验 生产前和生产末期用小白鼠做脑内法中和试验,以鉴定毒种的特异性。所用特异性抗血清由中国药品生物制品检定所提供。中和指数必须在500以上。生产过程中如对毒种发生疑问,应及时进行鉴定。 1.3 毒种传代 选择
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