信号通路表达载体,Pathway reporter

一、Pathway reporter简介：
细胞受到刺激时会做出一系列的反应，包括细胞增殖、分化、凋亡和炎症反应等，转录因子（Transcription factor, TF）在这些过程中发挥核心作用， 检测其活性水平的改变将直接联系到胞内信号通路的状况，有助于揭示细胞反应的分子机制。Geneup公司设计的信号通路报告载体，可以快速灵敏地检测转录因子的活性，对信号通路进行高通量筛选，也可以对特定信号通路进行实时监测。
1.普通质粒表达载体：pTRE-F.Luc


载体特征：

1. 在转录调控因子结合位点（TRE）上游插入了人造poly(A)终止信号，可以有效的降低背景；
2. 利用萤火虫荧光素酶基因（Fluc）可对信号活性做出准确的定量分析；
3. 利用Hygromycin抗性基因筛选稳定表达的细胞系。

2. 慢病毒表达载体：pL-TRE-F.Luc
载体特征：

1. 反向克隆TRE-pA-Fluc.copGFP表达框，可有效减少因LTR启动子造成的背景；

2. 利用萤火虫荧光素酶基因（Fluc）可对信号活性做出准确的定量分析；

3. 通过copGFP绿色荧光标记蛋白可实现对信号通路活性的快速观测；

4. 可以直接转染，也可包装成病毒后感染；

5. 利用Puromycin抗性基因筛选稳定表达的细胞系。

Pathway reporter实例

1. NFAT-FLuc


转染后24h用10ng/mL PMA和1µM ionomycin处理细胞，用Luciferase Assay进行检测。




2. NFkB-Fluc2

转染后24h用50ng/mL TNF-α处理细胞，用Luciferase Assay进行检测。


3. pTGFβ-Fluc2


转染后24h用25ng/µL TGFβ处理细胞，用Luciferase Assay进行检测。




4. pAP-1-Fluc2


转染后24h用10ng/mL PMA处理细胞，用Luciferase Assay进行检测。


5. HIF1a-Fluc2


转染后24h用250µM CoCl₂处理细胞8h，用Luciferase Assay进行检测。


Pathway reporter载体

1. pTRE-Fluc2系列：
已完成45个pathway reporter，详情见下表：

Vector Name	Pathway	Transcription Factor(TF)
pAhR-Fluc2	Xenobiotic	Xenobiotic Response Element
pAR-Fluc2	Androgen	Androgen Receptor
pAP-1-Fluc2	MAPK/JNK	AP-1
pATF4/3/2-Fluc2	Amino Acid Deprivation	ATF4/3/2
pATF6-Fluc2	ATF6	ATF6
pC/EBP-Fluc2	C/EBP	C/EBP
pCBF/NF-Y/YY1-Fluc2	ER Stress	CBF/NF-Y/YY1
pCREB-Fluc2	cAMP/PKA	CREB
pE2F/DP1-Fluc2	Cell Cycle	E2F/DP1
pEGR1-Fluc2	EGR1	EGR1
pElk-1/SRF-Fluc2	MAPK/ERK	Elk-1/SRF
pER-Fluc2	Estrogen Receptor	Estrogen Receptor (ER)
pFOXO-Fluc2	PI3K/AKT	FOXO
pGATA-Fluc2	GATA	GATA
pGLI-Fluc2	Hedgehog	GLI
pGR-Fluc2	Glucocorticoid Receptor	Glucocorticoid Receptor (GR)
pHNF4-Fluc2	Hepatocyte Nuclear Factor 4	HNF4
pHSF-Fluc2	Heat Shock Response	HSF
pHIF-1-Fluc2	Hypoxia	Hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1)
pIRF1-Fluc2	Interferon Regulation	IRF1
pKLF4-Fluc2	KLF4	KLF4
pLXRa-Fluc2	Liver X Receptor	LXRa
pMEF2-Fluc2	MEF2	MEF2
pMTF1-Fluc2	Heavy Metal Stress	MTF1
pMyc/Max-Fluc2	c-myc	Myc/Max
pNanog-Fluc2	Nanog	Nanog
pNFAT-Fluc2	PKC/Ca++	NFAT
pNFκB-Fluc2	NFκB	NFκB
pNrf2 & Nrf1-Fluc2	Antioxidant Response	Nrf2 & Nrf1
pOct4-Fluc2	Oct4	Oct4
pp53-Fluc2	p53/DNA Damage	p53
pPax6-Fluc2	Pax6	Pax6
pPPAR-Fluc2	PPAR	PPAR
pProgesterone Receptor-Fluc2	Progesterone	Progesterone Receptor
pRBP-Jk-Fluc2	Notch	RBP-Jk
pRAR-Fluc2	Retinoic Acid Receptor	Retinoic Acid Receptor (RAR)
pRetinoid X Receptor-Fluc2	Retinoid X Receptor	Retinoid X Receptor
pSMAD2/SMAD3/SMAD4-Fluc2	TGFβ	SMAD2/SMAD3/SMAD4
pSox2-Fluc2	Sox2	Sox2
pSP1-Fluc2	SP1	SP1
pSTAT1/STAT1-Fluc2	Interferon Gamma	STAT1/STAT1
pSTAT1/STAT2-Fluc2	Type I Interferon	STAT1/STAT2
pSTAT3-Fluc2	STAT3	STAT3
pTCF/LEF-Fluc2	Wnt	TCF/LEF
pVitamin D Receptor-Fluc2	VDRE	Vitamin D Receptor
pCMV-Fluc2-Negative Control
pFluc2-Positive Control

注明：如需包装慢病毒报告载体，请联系本公司销售部。


2. pL-TRE-Luc.copGFP系列：
已完成的pathway reporter见下表：

Vector Name	Pathway	Transcription Factor(TF)
pL-AhR-Fluc2	Xenobiotic	Xenobiotic Response Element
pL-AR-Fluc2	Androgen	Androgen Receptor
pL-AP-1-Fluc2	MAPK/JNK	AP-1
pL-ATF4/3/2-Fluc2	Amino Acid Deprivation	ATF4/3/2
pL-ATF6-Fluc2	ATF6	ATF6
pL-C/EBP-Fluc2	C/EBP	C/EBP
pL-CBF/NF-Y/YY1-Fluc2	ER Stress	CBF/NF-Y/YY1
pL-CREB-Fluc2	cAMP/PKA	CREB
pL-E2F/DP1-Fluc2	Cell Cycle	E2F/DP1
pL-EGR1-Fluc2	EGR1	EGR1
pL-Elk-1/SRF-Fluc2	MAPK/ERK	Elk-1/SRF
pL-ER-Fluc2	Estrogen Receptor	Estrogen Receptor (ER)
pL-FOXO-Fluc2	PI3K/AKT	FOXO
pL-GATA-Fluc2	GATA	GATA
pL-GLI-Fluc2	Hedgehog	GLI
pL-GR-Fluc2	Glucocorticoid Receptor	Glucocorticoid Receptor (GR)
pL-HNF4-Fluc2	Hepatocyte Nuclear Factor 4	HNF4
pL-HSF-Fluc2	Heat Shock Response	HSF
pL-HIF-1-Fluc2	Hypoxia	Hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1)
pL-IRF1-Fluc2	Interferon Regulation	IRF1
pL-KLF4-Fluc2	KLF4	KLF4
pL-LXRa-Fluc2	Liver X Receptor	LXRa
pL-MEF2-Fluc2	MEF2	MEF2
pL-MTF1-Fluc2	Heavy Metal Stress	MTF1
pL-Myc/Max-Fluc2	c-myc	Myc/Max
pL-Nanog-Fluc2	Nanog	Nanog
pL-NFAT-Fluc2	PKC/Ca++	NFAT
pL-NFκB-Fluc2	NFκB	NFκB
pL-Nrf2 & Nrf1-Fluc2	Antioxidant Response	Nrf2 & Nrf1
pL-Oct4-Fluc2	Oct4	Oct4
pL-p53-Fluc2	p53/DNA Damage	p53
pL-Pax6-Fluc2	Pax6	Pax6
pPPAR-Fluc2	PPAR	PPAR
pL-Progesterone Receptor-Fluc2	Progesterone	Progesterone Receptor
pL-RBP-Jk-Fluc2	Notch	RBP-Jk
pL-RAR-Fluc2	Retinoic Acid Receptor	Retinoic Acid Receptor (RAR)
pL-Retinoid X Receptor-Fluc2	Retinoid X Receptor	Retinoid X Receptor
pL-SMAD2/SMAD3/SMAD4-Fluc2	TGFβ	SMAD2/SMAD3/SMAD4
pL-Sox2-Fluc2	Sox2	Sox2
pL-SP1-Fluc2	SP1	SP1
pL-STAT1/STAT1-Fluc2	Interferon Gamma	STAT1/STAT1
pL-STAT1/STAT2-Fluc2	Type I Interferon	STAT1/STAT2
pL-STAT3-Fluc2	STAT3	STAT3
pL-TCF/LEF-Fluc2	Wnt	TCF/LEF
pL-Vitamin D Receptor-Fluc2	VDRE	Vitamin D Receptor
pL-Fluc2-Negative Control
pL-Fluc2-Positive Control