- ¥799 - 999
- 泰新生物
- 北京
- TX-03
- 2025年07月14日
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- 详细信息
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- 技术资料
- 注册证号：
详见说明
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
1年
- 英文名：
Evagreen qPCR Master Mix
- 库存：
库存充足
- 供应商：
北京泰新生物科技有限公司
- 规格：
500次/5ml
Evagreen qPCR Master Mix
使用说明
【货号】TX-03
【保存】-20℃以下避光保存。如短期内需继续使用，
融解后可在4℃避光保存，最长保存3周。
【说明】本产品提供了一个简便、灵敏、可靠地进行实时荧光PCR检测的完整系统。产品包含了经过优化的缓冲液组分、dNTP、化学修饰的热启动DNA聚合酶和MgCl2溶液及EvaGreen染料混合物，可用于以未标记引物进行的掺入法Real Time定量PCR。
【产品组成】Evagreen qPCR Master Mix 1000ul×1管（20ul体系 10rxn）
本产品适用于下列Realtime PCR仪：ABI PRISM®7700、ABI PRISM®7300、ABI PRISM®7500、ABI PRISM®7000、MJ Opticon 、BIORAD iCycler 、BioFlux公司的LineGene等的Realtime PCR仪。具体使用方法请参照相应仪器的说明书。
【PCR反应液配制】
| 反应液组份 | 加量 (μl) | 终浓度 |
| Evagreen qPCR Master Mix | 10 | 1× |
| 上游引物(10µM) | 0.4 | 0.2µM |
| 下游引物(10µM) | 0.4 | 0.2µM |
| 待检样品 | 1~10ng | － |
| MgCl2 | X | |
| 无菌去离子水 | up to 20μl | － |
Evageen为美国Biotium.Inc注册商标和专利所有，本公司授权使用。
图 1. EvaGreen® dye binds to dsDNA via a “release-on-demand” mechanism.
图2. EvaGreen无毒，无致突变性，对水生生物无危害性。
首先， EvaGreen 对 PCR 的抑制性远小于 SYBR Green I 。因此，使用 EvaGreen 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤。同时， EvaGreen 在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于 SYBR Green I 扩增信号（图 3）。较高浓度的 EvaGreen 也消除了“染料重分布”的缺陷，使 EvaGreen 既可用于多重 PCR ，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（ HRM ）（图 4 ）。该分析正被越来越多的用于 PCR 后的基因分型和异源双链分析 。由于 SYBR Green I 对 PCR 的抑制性，从而要求其使用浓度必须很低，因此 SYBR Green I 无法解决由低浓度造成的染料重分布问题，既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM 。同时，染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性，因为低熔点的 DNA 链可能由于这种原因而无法检测到 。
- 在推荐浓度下使用时可以获得最强的 PCR 扩增信号。
- 智能化的“按要求释放” DNA 结合技术使得 EvaGreen 对 PCR 的抑制远小于 SYBR Green I 。
- 对 PCR 干扰极小，从而极大的缩短了 PCR 延伸时间。
- 无“染料重分布”缺陷，兼容 PCR 后的高分辨率熔解曲线（ HRM ）分析。
- 在推荐浓度下使用时，无扩增子之间的染料迁移现象。
- 在大部分生化条件下非常稳定，可在室温下储存并可反复冻融。
- 图6 细胞膜穿透性测试表明，EvaGreen几乎不能穿透细胞膜，安全性高
- 和 SYBR GREEN I 光谱相似,和各知名品牌的 qPCR 仪器兼容。 用 EvaGreen 替代 SYBR Green 1 ，毋须改变任何您目前使用的操作步骤和仪器设备。
第二， EvaGreen 的稳定性极好。在正常的储存、操作和 PCR 过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里，也可以反复冻融。与之相反， SYBR Green I 不稳定而且降解后对 PCR 抑制性更强 。
EvaGreen 降低了细胞膜透性，因而比 SYBR Green 1 更加安全。独立实验室的测试结果显示， EvaGreen 既没有诱变性也没有细胞毒性 。相反，虽然 SYBR Green I 本身诱变性很弱，但它在细胞中可能抑制了正常 DNA 的修复机制，使其有诱变增强作用 。考虑到 PCR 的广泛使用，其安全性应该得到足够重视。
| 图3. 比较Biotium公司的 Fast EvaGreen master mix (green)和 ABI (blue) 和 Qiagen (red)fast SYBR Green master mixes, 显示相比 SYBR Green，EvaGreen 有着超级灵明度。 （ A fragment of ATPG was amplified from varying amounts of human genomic DNA (200 ng to 20 pg) using an ABI 7900 Fast thermocycler.） |
图 4 . 在 Rotor Gene 6000 上使用 EvaGreen 进行高分辨率熔解曲线（ HRM ）分析可以明显的区分三个不同的基因型：突变型（红色）、杂合型（紫色）和野生型（蓝色）。（数据由 Corbett Research 提供） | |
| 图 5 . EvaGreen 在 PBS 缓冲溶液中结合 dsDNA 后的激发和发射光谱 |
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文献和实验几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
