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美国GENMED主要运用世界上最尖端的基因综合技术平台(数字化染色体基因型完全分析技术、表观基因组完全分析技术、染色体单体分离分析技术、基因靶标技术、全基因表达完全分析技术、RNA拼接图谱综合分析技术、SiRNA完整表达文库构建技术、细胞抗原谱学技术、胶体金层析法金标技术、蛋白激酶组学完全分析技术、蛋白表位标记技术、Seldi蛋白质谱分析技术、高容量细胞荧光筛选技术、高通量远红外细胞免疫筛选技术),从事疾病指纹诊断系统、农作物种子改造和分子操作、生物反应器、中草药和海洋生物抗肿瘤活性物质筛选、基因检测中心、技术平台服务和培训等独步天下的杰美产品和服务体系的开发,以期成为基因医学产业化的领军企业。
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文献和实验,不同的裂解液配方溶解效率不同,通常使用的 NP-40、RIPA 等裂解液无法将所有蛋白全部溶出(如图 2),已经有研究发现细胞骨架、细胞外基质蛋白及部分膜蛋白、核蛋白等属于难溶蛋白,在提取过程中会形成不可溶沉淀[3]。如果目的蛋白属于这类难溶蛋白,仅使用可溶性组分(上清)用于 WB 实验时,目的蛋白将无法被检测到。针对这种情况,我们可以选择更加有效的裂解液配方,或者使用柱式蛋白提取法来增溶目的蛋白。例如,使用柱式法总蛋白提取法,可有效溶解难溶蛋白,避免不可溶组分的产生,有效解决蛋白丢失问题
,首先使用 Invent 柱式法胞质胞核分离试剂盒将样品分为胞浆蛋白和胞核蛋白,每组按照胞浆组分,胞核组分顺序分别上样,使用 GAPDH 作为胞浆内参,LaminA/C 作为胞核内参,验证胞质胞核分离成功无交叉污染。 检测目标蛋白 NF-ĸB p65,验证了过表达 circ-Sirt1 的血管平滑肌细胞(VSMCs)中,TNF-ɑ 诱导的 NF-ĸB p65 的核易位被显著抑制,并伴有促炎细胞因子和黏附分子表达减少(图 E)。相反,敲低内源性 circ-Sirt1 增强了 TNF-ɑ 诱导的 NF-ĸB
提取液、细胞或微生物培养基上清液、血液、尿液、脑脊液等各种体液。蛋白回收率95%,远高于经典的丙酮或三氯醋酸沉淀法,且可有效去除样品中的脂质,不影响后续SDS-PAGE和Western Blot实验。可用1.5ml离心管微量提取也可大规模制备,15分钟完成提取,简便高效。次试剂盒也适于从细胞悬液提取总蛋白。实体组织和细胞总蛋白提取可用蛋白提取试剂盒I (Cat# P1250: Tissue/Cell Protein Extraction Kit)。适用:(1).溶液、血液、尿液、脑脊液、培养上清液、胞浆胞核蛋白
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