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- 2025年10月24日
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深圳子科生物
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文献和实验重要。1.转膜时间2. 转膜过程环境温度3. 转膜缓冲液使用次数4．转膜缓冲液中甲醇比例（v/v）（三）一抗使用*使用IRS1（150kDa）、pPERK（125kDa）和内质网应激XBP1（29/55kDa）抗体等检测小鼠肝组织探讨一抗在多种条件下对结果影响（IRS1，pPERK和 XBP1 用于 WB 检测难以出现清晰条带，因此选择合适的一抗及孵育条件就很关键）。1.一抗稀释溶剂2.一抗稀释比例3.一抗孵育时间（四）二抗使用*高浓度的二抗会导致大量非特异性结合，造成WB背景较深。1.二抗稀释比例 （洗释
条件至关重要。1. 转膜时间2. 转膜过程环境温度3. 转膜缓冲液使用次数4．转膜缓冲液中甲醇比例（v/v）（三）一抗使用* 使用 IRS1（150kDa）、pPERK（125kDa）和内质网应激 XBP1（29/55kDa）抗体等检测小鼠肝组织探讨一抗在多种条件下对结果影响（IRS1，pPERK 和 XBP1 用于 WB 检测难以出现清晰条带，因此选择合适的一抗及孵育条件就很关键）。1. 一抗稀释溶剂2. 一抗稀释比例3. 一抗孵育时间（四）二抗使用* 高浓度的二抗会导致大量非特异性结合，造成 WB
【原创】暗室实验（化学发光底物检测方法）及Western Blot实验优化方法
%的Tween-20 封闭液封闭膜上的非特异性点，室温震荡孵育1 h。 5. 将一抗稀释到封闭液/Tween-20 去污剂中，并加到膜上，室温震荡孵育1h。 6. 用TBS 或PBS 洗膜4-6 次，用尽可能大体积的洗脱液，在洗脱液中加入0.05%的吐温，用以减少非特异背景。每次洗脱过程中，使膜悬浮在洗脱液中震荡大约5 分钟，倒出洗脱液并重复。孵育前，在洗脱液中短时间的漂洗可能会增加洗脱效率。 7. 制备二抗/HRP 结合的封闭试剂/Tween-20 去垢剂稀释液，将二抗稀释液加到膜上震荡孵育1 h
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