2. 计算时应用消光系数,故比色计要校正波长。用标准管计算较方便、准确。
该产品被引用文献(仅展示部分):
Lu H; Yin K; Su H, et al., Polystyrene microplastics induce autophagy and apoptosis in birds lungs via PTEN/PI3K/AKT/mTOR. Environ Toxicol 2022.
PubMed: 36205374
操作流程:
1. 试剂配制。
试剂一 : 先向甲粉试剂中加入90-100°C的热双蒸水(50T 加入85ml;100T 加入170ml),充分完全溶解。然后将已配好的甲液与乙液充分混合。此为过饱和溶液,室温静置冷却后,如有结晶,则取上清进行实验,室温保存6个月。
试剂二:用时加双蒸水(50T加入100ml;100T加入200ml), 充分完全溶解,室温保存6个月。
试剂三:用时加双蒸水至50ml溶解,避光4°C保存6个月。
试剂四:用时每支加双蒸水10ml溶解,避光4°C可保存5天。
GSH标准品溶剂应用液:按GSH标准品溶剂贮备液:双蒸水=1 : 9 , 加入9倍体积的双蒸水进行稀释,现用现配。
10mmol/L GSH标准品溶液的配制:GSH的分子量为307,每次测定前将10mg的GSH标准品加入到3.25ml的GSH标准品溶剂应用液中,混匀,现用现配。
20µmol/L GSH标准品溶液:取10mmol/L GSH标准品溶液0.02ml加入GSH标准品溶剂应用液9.98ml,现用现配。
2. 样本前处理。
a. 全血:取0.1ml肝素抗凝全血加双蒸水0.9ml,充分混匀,直至透亮为止。
b. 血清(浆):直接取原液进行检测。
c. 组织:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1 : 9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,2500rpm离心10min,取上清液进行测定。
3. 上清液的制备。
取待测样本0.5ml,加试剂一应用液2ml混匀,3500-4000rpm离心10min,取上清液1ml进行显色反应。
4. 显色反应。
混匀,静置4min,420nm处,1cm光径,蒸馏水调零,测各管OD值。
注:请在5min内完成OD值测定,以减少误差提高精确度。
5. 计算
全血,血清(浆)中GSH含量(gGSH/L)= (测定OD值 - 空白OD值)/(标准OD值 - 空白OD值)x标准品浓度(20×10-6mol/l)×GSH分子量 (307) x样本测试前稀释倍数
组织中GSH含量(gGSH/gprot)=( 测定OD值 - 空白OD值) /(标准OD值 - 空白OD值)x标准品浓度(20×10-6mol/l) ×GSH分子量 (307)x样本测试前稀释倍数÷待测匀浆蛋白浓度(gprot/L)
注 :
1.全血样本测试前稀释倍数 = 溶血液制备时稀释倍数(10倍) 上清液制备时稀释倍数( 倍)x 5
52.血清/组织样本测试前稀释倍数 = 上清液制备时稀释倍数( 倍)