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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20 °C
- 保质期:
1年
- 英文名:
Amylin1-37/FITC
- 库存:
66
- 供应商:
子科生物
- 规格:
0.5毫克/1毫克
抗体的保存建议:
抗体保存得当与否直接决定了抗体的活性和使用效果。如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。请按照说明书或者抗体标签上推荐的保存条件正确保存抗体!无论是保存还是运输,绝对避免反复冻融抗体!
1、拿到抗体后请务必在1000-3000转离心1-2分钟后再打开管盖进行分装和保存!(由于运输过程中反复颠簸,管内微量抗体容易聚集在管盖处,一旦直接打开容易流失抗体。请放心抗体出厂时保证已装入足量。)
2、对于大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃冰箱。
▶分装可以最大程度降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了多次从同一管中吸取抗体造成污染的可能性。
▶分装的量以一次实验用完为好,但建议最少不要少于10μL每份。分装体积越小,抗体浓度可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响,同时分装次数越多移液吸头吸附的抗体也越多,可能会误认为抗体没有足量装入。(最好用无菌的进口0.2ML离心管来分装抗体,国产的小管一般没有经过很好的硅化处理,容易吸附抗体蛋白,影响抗体活性。)
▶分装时请将无菌的微量移液器吸头先插入管底部反复吹打几次后再吸出抗体,以便抗体有效成分与抗体保护剂充分混匀。
▶复融后的分装抗体如果一次用不完,请将剩余母液保存在4℃冰箱,避免再冻起来!
▶绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱的冷藏室中。尽量将抗体保存在手动除霜冰箱里面,而不是在冰箱门上。
3、大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是基本没有影响的。如果抗体很快(1-2周内)就能使用完,推荐在4℃保存,避免反复冻融对抗体活性的损害。如果要长期保存则分装后-20℃保存。
4、即用型抗体请务必保存在4℃冰箱,一定不能冷冻保存。
5、特殊抗体的保存:
▶酶联抗体:一般保存在4℃,尽量避免冷冻起来。否则可能会导致酶活力的下降或者丧失。
▶偶联抗体:所有偶联抗体需要4℃避光保存。尤其是荧光标记抗体,对光极为敏感,因此所有实验阶段也是要避光操作的。
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文献和实验min。②荧光素的准备 根据欲标记的蛋白质总量,按每毫克免疫球蛋白加0.01mg荧光色素,用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末。也可用下述公式计算出免疫球蛋白、荧光素的量,还可以算出需加缓冲液的量。a.蛋白溶液:含量Amg/m1;容积Bml。b.总蛋白量(AXB)=Crag。c.C/20~C/10=Dmg(如蛋白含量低于20mg/ml,用C/10;如高于20mg/ml,用C/20)。d.荧光素FITC的量:(1/50~2/100)XC=Emg。e.巳0.5mol/L(pH9.5)碳酸盐缓冲
(一) 原理 目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗 达明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε 氨基共价结合,标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光 激发下产生黄绿色荧光,通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定 性、定位或定量
荧光素FITC标记抗体的方法(Marsshall法、Chadwick法、改良法、透析标记法)
当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一般最多能结合15~20个,一个IgG分子可结合2~8个分子的FITC,其反应式如下 FITC-N=C=S + N-H 2 -蛋白质 → FITC-NS-C-N-H 2 -蛋白质 常用
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