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- DK312
- 2026年01月03日
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- 文献和实验
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大量
- 供应商：
上海莱枫
- 规格：
50次
处理菌液体积与产量：5-15 ml LB菌液，每毫升LB菌液中可获得5-10 μg高拷贝质粒DNA。
质量与应用：内毒素含量低于6 EU/mg质粒DNA，以超螺旋构型为主，无RNA与基因组DNA残留，可用于细胞转染。
产品使用说明书：无内毒素质粒DNA小提中量试剂盒
更多产品信息请关注：www.lifefeng.com
附:鲎试剂凝胶法检测内毒素
规格：0.1 ml 灵敏度：0.06 EU/ml 检测下限：0.006 EU/支（购自厦门市鲎试剂实验厂有限公司）
| 检测组 | 37℃正立放置1小时，观察凝胶形态 |
| 1. 阴性对照：100 μl无内毒素水 | 液态：材料与操作过程无内毒素污染 固态：材料或操作过程有内毒素污染，实验数据无效 |
| 2. 阳性对照：用无内毒素水配制标准品至0.25 λ(0.06 EU/ml)，100 μl | 液态：鲎试剂失效，实验数据无效 固态：鲎试剂有效，达到预期灵敏度 |
| 3. 干扰测试：1-2 μg 质粒DNA与0.25 λ标准品混合，100 μl | 液态：鲎试剂失效或检测样品干扰凝胶反应，实验数据无效 固态：检测样品不影响凝胶反应 |
| 4. 检测样品：1-2 μg 质粒DNA加无内毒素水至100 μl | 液态：内毒素含量<0.006 EU/μg DNA (6 EU/mg DNA) 固态：内毒素含量>0.006 EU/μg DNA (6 EU/mg DNA) |
通常使用本试剂盒提取的质粒DNA检测量为1-4 μg，无凝集反应。
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文献和实验CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
来看一下。提交订单，等待引物到达：华大基因的速度非常快，大约在 2 - 3 个工作日即可拿到，在等待期间需要准备好：LB + 抗生素抗性平板；感受态细胞及相应培养基；无内毒素的 Cas9 载体质粒；BbsI 限制性内切酶；质粒小提试剂盒；常规限制性内切酶。
只适合酶切测序等。而我用无内毒素大提试剂盒时，就没出现这种情况，溶度有1000多微克每毫升。所以，建议：1.要转染最好就用无内毒素大提试剂盒2.已小提，想纯化滤菌用于转染建议参考“将质粒溶液进行浓缩，每50微升质粒溶液加2微升5mol/L NaC1混匀，冷的无水乙醇沉淀质粒，10 000r/min离心5min，弃去上清，用70% 的乙醇洗1次，无菌条件下真空干燥，以灭菌生理盐水溶解质粒至质量浓度为1 微g/微L，一20度保存。质粒转染前，行酶切及测序鉴定。”
程度等等。 现在大部分质粒提取都用试剂盒， 根据实验需要我们可以选择不同级别的产品： 1. 从纯度上看：常规操作（如酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化），普通纯度的质粒即可；对于转染实验，则需要无内毒素质粒提取试剂盒。 2. 从提取量上看：1-20μg，小量提取试剂盒；20-40μg，中量提取试剂盒；大于40μg，大量提取试剂盒。 3. 宿主菌类别上：主要分为普通细菌质粒提取试剂盒，真菌质粒提取试剂盒，酵母菌质粒提取试剂盒。 举例：SunShinecleanTM无内毒素质粒小量抽提试剂盒采用新型
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