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- Thermo scientific -fermentas
- ER1101
- 2025年09月29日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer B | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1101 | 300 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1101 | |
| ER1102 | 1500 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1102 | |
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| B | 37°C | 100 | 0-20 | 0-20 | 0-20 | 20-50 | 0-20 | 1X |
Lambda DNA (dam- )
1.4%琼脂糖
168 切割位点
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
备注
- 底物为λ DNA (dam- ) (#SD0021)。
- 重叠的Dam甲基化抑制HphI酶切。为了避免Dam甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提，如GM2163 (#M0099)。
- 高浓度甘油(>5%)、pH �>8.0或过量酶切会导致星活性。
Dcm: 可能重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 阻止酶切。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dam (GATC) | 5'...GGTGm6A TC ...3' |
阻止酶切 |
| Dcm (CCWGG) | 5'...Cm5CW GG TGA...3' |
不阻止酶切 |
| CpG | 5'...m5C G GTGA...3' |
不阻止酶切 |
| EcoBI (TGA(N)8 TGCT) | 5'...GGTGm6A(N)8 TGCT...3' |
阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 168 | 9 | 18 | 12 | 7 | 7 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 6 | 6 | 6 | 6 | 17 | 16 |
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文献和实验/GATCY) 这几个酶切产物粘端突出部分都一样是 5’GATC，能互补，可以相互连接。此外，所有平末端酶切产物都可以相互拼接，只是连接效率低些。要是运气再背点、酶切粘端怎么都不配对？用 Klenow 大片段或者T4聚合酶或“削平”或“补齐”得到平末端，再“强行连接”。。。这种目标片段前后都是平端的、或者单酶切的，载体“自恋”（自我连接）还可以用大小区分，目标片段可能正向接入或者倒装，如何在筛选时进行区分，又多了一个麻烦事儿。要是用到甲基化敏感的内切酶，比如 HPhI（对 Dam、Dcm 甲基化敏感
子，例如用PCR-SSO技术进行HLA分型时，HLA-DRB1* 0403/0408、HLA-DRB1*0404/0407 杂合子的杂交格局是相同的，而PCR-RFLP技术采用SacII + HpHI双酶切就可以显示出显然不同的酶切片段，从而鉴定出杂合子；（4）在样本数目较少的情况下，PCR-RFLP方法的费用低。 由于PCR-RFLP分型技术是基于限制性核酸内切酶识别位点的特异性，而限制性核酸内切酶并不能识别所有的碱基变化，所以PCR-RFLP技术尚不能检出所有的HLA等位基因。 【试剂
内切酶列表：Enzymes Generating 3-protruding Ends
GGTGA(8/7)^* HphI N GKGCM^C BseSI KGCM
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