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- Thermo scientific -fermentas
- ER0501
- 2025年09月28日
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- 文献和实验
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer R | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER0501 | 5000 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER0501 | |
| ER0502 | 5 x 5000 u (10 u/µl) | 2 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER0502 | |
| ER0503 | HC, 25,000 u (50 u/µl) | 2 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER0503 | |
| ER0505 | 10000 u (10 u/µl) | 4 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER0505 | |
| ER0507 | 2000 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER0507 | |
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| R | 37°C | 0-20 | 20-50 | 0-20 | 100 | 50-100 | 50-100 | 1X or 2X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
6 切割位点
10 mM Tris-HCl (pH 8.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM KCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 250 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 部分影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| EcoBI (TGA(N)8 TGCT) | 5'...TGm6AAGCTT(N)3 TGCT...3' |
部分影响 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0 | 0-20 | 50-100 | ||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 6 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
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文献和实验,构成基本名称.该种中发现的不同的酶按照顺序编号I, II, III等.如存在变种和品系,取变种或品系的一个字母.若酶存在于质粒上,则需大写字母表示非染色体遗传因子. 如,HindIII从Haemophilus Influenzue d株中分离的第三个酶.EcoRI表示基因位于Escherichia coli中的抗药性R质粒上. (三)II类限制性内切酶的底物识别顺序及切割位点 绝大多数的II类限制性内切酶在底物DNA上的识别顺序长度为4,5,6碱基
与分子量的对数成反比。要准确地确定DNA片段的大小，必须用分子量标准物同时进行电泳对照。常用的分子量标准是lDNA/EcoRI、lDNA/HindIII、lDNA/EcoRI+HindIII的酶切片段 实验材料和试剂 (一)实验材料 实验二提取的质粒 pUC118 (二)试剂 1.限制性内切酶 BamHI 2.l DNA/HindIII分子量标准 3.双蒸馏无菌水
+HindIII对质粒DNA进行双酶切，以便进行某基因的克隆。 那么，我们建议，同时设计并进行三种酶切反应： A: EcoRI+HindIII 双酶切 B: EcoRI单酶切 C: HindIII单酶切 在酶切时，ABC三种酶切反应都用相同的buffer系统，相同的DNA量（建议至少0.5ug）， 所需的酶量用DDDesigner进行计算。在合适的温度（37度）酶切1-2个小时， 然后进行电泳分析。电泳分析时，添加两种对照：D:未酶切的质粒DNA和分子量标准
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