O型口蹄疫抗体检测试剂盒

1 抗原预包被板条 1/2块 7 终止液 6ml
2 酶结合物 5/10ml 8 阴性对照 800µl
3 10倍浓缩洗涤液 50ml 9 阳性对照 400/800µl
4 底物A液 6ml 10 封板膜 2/4张
5 底物B液 6ml 11 说明书 1份
6 样本稀释液 50ml 12

口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）抗体检测试剂盒用于检测猪、牛、羊血清中的口蹄疫病毒抗体，用于评估口蹄疫苗免疫状况。

需自备的设备及试剂
1. 微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸头。
3. 量筒：500ml。
4. 96孔板酶标仪。
5. 蒸馏水或去离子水。
6. 洗瓶或洗板机。

样品制备
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

注意事项
1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。
2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
4. TMB（底物B液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。
6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
8. 抗原包被板为一次性用品，不得重复使用；
操作步骤
1. 每次试验均设置空白孔1孔、阳性对照1孔、阴性对照2孔；
2. 将样品稀释液按50ul/孔加入到微孔反应板内，之后将待检样品血清、阴性对照、阳性对照按50ul/孔加入孔内并吹打混匀（移液器枪头请勿混用）；
3. 盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育60分钟。
4. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，加满液体后停留1分钟，后甩去孔内液体，以上步骤重复3次，最后在干净吸水纸上拍干。
5. 每孔加酶结合物50μl，盖上封板膜，置37℃温育60分钟。
6. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤3次, 方法同4。切记最后在干净吸水纸上拍干。
7. 每孔先加底物A液50µl、再加底物B液50µl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
8. 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定
以空白对照调零用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度A值。
试验成立的条件是：
N值>0.8、P值<0.4；
计算方法：
PI (阻断率)= 1 —（样品OD值 ÷ 阴性OD均值）
阴阳性判断：
牛、羊样本
PI(阻断率)>45%则判断为阳性；
PI≤45%则判断为阴性。

猪样本
PI(阻断率)>35%则判断为阳性；
PI≤35%则判断为阴性。

有效期
贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。
有效期： 12个月。

有效期
贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。
有效期： 12个月。

口蹄疫是猪、牛、羊等主要家畜和其它家养、野生偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，易感动物达70多种。临床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱性疹。该病传播途径多、速度快，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大政治、经济损失。鉴于此，世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类传染病之首。目前，有三分之二的 OIE 成员国流行 FMD，时刻威胁着无 FMD 国家和地区的家畜安全和畜产品贸易。口蹄疫病毒属于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属。其最大颗粒直径为23纳米，最小颗粒直径为7—8纳米。目前已知口蹄疫病毒在全世界有七个主型 A、O、C、南非1、南非2、南非3、亚洲1