BstXI

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER1021
  • 2025年09月22日
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      大量

    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : O
    • - 孵育温度55°C
    • - 连接效率95%
    • - 星活性
    • - Dcm甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - 热失活80°C, 20 min
    • - 基因组级别
    • - 蓝/白鉴定
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer O 10X Buffer Tango™
    ER1021 500 u (10 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml ER1021
    ER1022 2500 u (10 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml ER1022
    ER1027 200 u (10 u/µl) 1.00 ml 1.00 ml
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    O 55°C 20-50 100 100 50-100 50-100 100 1X or 2X

    Lambda DNA
    0.7%琼脂糖
    13 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液O:
    50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
    55°C酶切。

    保存缓冲液
    BstXI保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍BstXI过量酶切后,大约95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    琼脂糖包埋DNA酶切
    至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

    备注
    • 37°C酶切时只有50%的酶活性。
    • 超过15倍过量酶切会导致星活性。
    • 重叠的Dcm甲基化阻止BstXI酶切,为避免Dcm甲基化的影响,样本DNA需从dam-, dcm- 菌株中抽提,如GM2163 (#M0099)。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 可能重叠 – 部分影响。
    CpG: 无重叠 – 不影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 无重叠 – 不影响。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dcm (CCWGG)

    5'...Cm5CA GG (N)4 TGG...3'
    3'...G GTm5CC (N)4 ACC...5'

    不阻止酶切
    Dcm (CCWGG)

    5'...Cm5CA GG NNCm5CT GG ...3'
    3'...G GTm5CC NNG GAm5CC ...5'

    阻止酶切
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    0 50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    13 3 0 0 0 0
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    0 0 1 1 0 0

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