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- Thermo scientific -fermentas
- ER1181
- 2025年09月20日
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|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer Bpu10I | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1181 | 200 u (5 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1181 | |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| Bpu10I | 37°C | 0-20 | 20-50* | 50-100* | 100* | 50-100* | 100* | 1X* or 2X* |
* –星活性比5倍过量酶切(5 units x 1 hour)还强。
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
19 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液Bpu10I：
10 mM Bis-Tris Propane-HCl (pH 6.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM KCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Bis-Tris Propane-HCl (pH 6.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM KCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液
Bpu10I保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 200 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 200 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
连接和重新酶切
50倍Bpu10I过量酶切后，超过90%的pBR322 DNA酶切产物可以连接(连接体系：20-40 u T4 DNA连接酶/1 μg酶切产物，10% PEG)，不超过50%连接产物能重新酶切，剩下的未切割连接产物可以被Eco81I (SauI)和Bpu1102I (EspI)切割。
备注
- 过量酶切(>4 u/1 μg DNA)导致DNA的不完全酶切，因此酶切时推荐延长酶切时间，而不是增加酶量。
- 低盐、pH >7.0、高浓度甘油(>5%)或过量酶切会导致星活性。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
兼容性末端
Bpu1102I, DdeI, Eco81I。
甲基化影响
Dam: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | 5'...CCTNAGm5C G ...3' |
不阻止酶切 |
| EcoBI (TGA(N)8 TGCT) | 5'...CCTGm6AGC(N)6 TGCT...3' |
不阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 20-50 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 19 | 7 | 4 | 1 | 0 | 0 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 0 | 0 | 0 | 0 | 5 | 3 |
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