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ApaI

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  • Thermo scientific -fermentas
  • ER1411
  • 2025年11月06日
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      大量

    • - FastDigest®限制酶
    • - 推荐的缓冲液 : B
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - Dcm甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - CpG甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - 热失活65°C, 20 min
    • - 基因组级别
    • - 重组酶
    • - 蓝/白鉴定
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Buffer B 10X Buffer Tango™
    ER1411 3000 u (10 u/µl) 2 x 1.00 ml 1.00 ml ER1411
    Reaction conditions
    Recommended buffer for 100% activity Optimal temperature Enzyme activity in Fermentas buffers, % Tango™ buffer for double digestion
    B (blue)
    1X
    G (green)
    1X
    O (orange)
    1X
    R (red)
    1X
    Tango™ (yellow)
    1X / 2X
    B 37°C 100 20-50 0-20 0-20 20-50 0-20 1X

    Lambda DNA
    0.7%琼脂糖
    1 切割位点

    100%酶活性的反应条件
    1X 缓冲液B:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
    37°C酶切。

    保存缓冲液
    ApaI保存在:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 50 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

    连接和重新酶切
    50倍ApaI过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

    琼脂糖包埋DNA酶切
    至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

    备注
    • 30°C时酶活性增加2倍。
    • 反应体系中盐浓度超过50 mM时抑制ApaI的酶活性。
    • 重叠的Dcm甲基化阻止ApaI酶切。为了避免Dcm甲基化的影响,样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中制备,如GM2163(#M0099)。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    双酶切
    采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

    兼容性末端
    BseSI (GGGCC^C), Eco24I (GGGCC^C), SduI (GGGCC^C)。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 可能重叠 – 部分影响。
    CpG: 可能重叠 – 部分影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 无重叠 – 不影响。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dcm (CCWGG)

    5'...GGGCCm5CW GG ...3'
    3'...CCCGG GWm5CC ...5'

    部分影响
    CpG

    5'...GGGCCm5C G ...3'
    3'...CCCGG Gm5C ...5'

    部分影响
    CpG

    5'...m5C G GGCCm5C G ...3'
    3'... Gm5C CCGG Gm5C ...5'

    部分影响
    Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments
    bp from the recognition site to fragment end
    1 2 3 4 5
    50-100
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    1 0 0 0 0 1
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    0 1 1 1 0 0

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    图标文献和实验
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      A/CCGGT NgoMIV G/CCGGC AhdI GA***N/NNGTC NheI G/CTAGC ApaI GGGCC/C NotI GC/GGCCGC ApaLI G/TGCAC NruI TCG/CGA AscI GG/CGCGCC NsiI ATGCA/T AseI AT/TAAT OliI CA***/NNGTG AsiSI GCGAT/CGC PacI TTAAT/TAA AvrII C/CTAGG PciI A/CATGT BaeI A***NNGTAYC,12

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    • 常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)

      -methyladenine. 酶 类型 识别序列 ApaI Type II restriction enzyme 5'GGGCC^C

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