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- Thermo scientific -fermentas
- ER1411
- 2025年11月06日
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- 详细信息
- 技术资料
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大量
|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer B | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1411 | 3000 u (10 u/µl) | 2 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER1411 | |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| B | 37°C | 100 | 20-50 | 0-20 | 0-20 | 20-50 | 0-20 | 1X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
1 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液B：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液
ApaI保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 50 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 50 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
连接和重新酶切
50倍ApaI过量酶切后，超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。
琼脂糖包埋DNA酶切
至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。
备注
- 30°C时酶活性增加2倍。
- 反应体系中盐浓度超过50 mM时抑制ApaI的酶活性。
- 重叠的Dcm甲基化阻止ApaI酶切。为了避免Dcm甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中制备，如GM2163(#M0099)。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
兼容性末端
BseSI (GGGCC^C), Eco24I (GGGCC^C), SduI (GGGCC^C)。
甲基化影响
Dam: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 可能重叠 – 部分影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 可能重叠 – 部分影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dcm (CCWGG) | 5'...GGGCCm5CW GG ...3' |
部分影响 |
| CpG | 5'...GGGCCm5C G ...3' |
部分影响 |
| CpG | 5'...m5C G GGCCm5C G ...3' |
部分影响 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 50-100 | ||||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 0 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 |
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