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T4 RNA Ligase

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  • 2025年10月13日
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    • 品牌

      Thermo scientific -fermentas

    • 货号

      EL0021

    • 库存

      大量

    • - 热失活70°C, 10 min
    • - 重组酶
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Reaction Buffer 1 mg/ml BSA Solution
    EL0021 1000 u (10 u/µl) 0.20 ml 0.20 ml EL0021
    Applications

    • RNA 3’-末端标记胞嘧啶3’,5’-双[alpha-32 P]磷酸(1)。
    • RNA和RNA连接(2)。
    • 合成寡核苷酸的环化(3, 4)。
    • tRNAs的特异性修饰(5)。
    • 寡聚脱氧核糖核苷酸与单链cDNA连接,用于5’ RACE(快速扩增cDNA末端)分析 (6)。
    • 位点特异性产生复合的PCR引物(7)。
    说明
    T4 RNA ligase催化ATP依赖的分子内和分子间磷酸二酯键连接(5’-磷酸基团和3’-羟基末端),底物分子为多聚核苷酸、寡核苷酸、ssRNA和ssDNA。

    分子之间的最小的连接底物是核苷3’,5’ -二磷酸,而分子内连接的最小底物是8个碱基的寡核苷酸。


    来源
    含有T4噬菌体克隆基因63的大肠杆菌。

    分子量
    43.6 kDa,单体。

    活性单位定义
    1个活性单位是指37°C、30分钟内将1nmol 5’-[32 P]-(A)12-18 转换为磷酸酶抗性形式所需的酶量。

    酶活性分析混合物:50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2 , 10 mM DTT, 1 mM ATP, 10 µM 5'-[32 P]-(A)12-18 (10 µM, 5’-末端)。


    保存缓冲液
    保存缓冲液组分:
    20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM DTT, 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 0.03% (v/v) ELUGENT变性剂和50% (v/v)甘油。

    10X 反应缓冲液
    500 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 100 mM MgCl2 , 100 mM DTT, 10 mM ATP。

    质量控制
    相关测试表明无核糖核酸酶、内切脱氧核糖核酸酶、外切脱氧核糖核酸酶和磷酸酶污染。

    抑制与失活
    • 抑制剂:金属螯合剂、SH基团修饰试剂(8)。
    • 失活:70°C加热10分钟。

    备注
    • 推荐的BSA反应浓度是0.1 mg/ml。


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